Page 149 - 《精细化工》2020年 第10期
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第 10 期                        但   凡，等:  荷叶碱自组装纳米粒的制备与评价                                 ·2079·


                 荷叶碱的生物可利用率按式（6）进行计算。                          附近无色谱峰，而荷叶碱-空载纳米粒混合物在
                           BA/%     /       100  （6）    16.417  min 时有色谱峰，且峰型稳定，说明空载自
                                   1  0
            式中：BA 为生物可利用率，%；  为荷叶碱经肠                        组装纳米粒不干扰主药物荷叶碱的测定，符合专属
                                             0
            胃液消化前的质量浓度，g/L； 为荷叶碱经肠胃液                         性实验的要求。
                                         1
            消化并离心后，上清液中荷叶碱的质量浓度，g/L。
            1.9    体外释放特性评价
                 参照文献[17-18]，将 1  mL 荷叶碱自组装纳米
            粒子悬液置于透析袋内，两端夹紧置于装有 100 mL
            PBS 溶液（添加盐酸使其质量分数为 2%）的烧杯中。
            将烧杯置于 37  ℃恒 温振荡器中，设置转速为
            100 r/min。分别于 0.5、1、2、4、6、8、12、24、
            48 h 从烧杯中取样 1 mL，检测荷叶碱的含量，同时
            补加等量 PBS 溶液；以取等量荷叶碱溶解在质量分
            数为 2%的盐酸溶液中作为对照组。按照式（7）计
            算累计释放率，绘制荷叶碱体外释放曲线。                                图 1    荷叶碱标准品（a）、空载纳米粒（b）和荷叶碱-空
                                    n 1                          载纳米粒混合物（c）的 HPLC 图
                     CR / %     VV     /     0     100  （7）   Fig. 1    HPLC of standard nuciferine (a), unloaded nanoparticles
                              n    1   t                           (b) and mixture of nuciferine-unloaded nanoparticles (c)
                                    t  1   
            式中：CR 为累计释放率，%；ρ 0 和 ρ n 分别为初始和
                                                               2.2    荷叶碱磷脂-壳聚糖自组装纳米粒制备工艺分析
            第 n 次取样时荷叶碱的质量浓度，g/L；ρ t 为第 t 次
                                                               2.2.1    原始的溶剂注入法下自组装纳米粒的包封率
            （从第 1 次取样到第 n–1 次取样加和）取样时荷叶
                                                                   用原始的溶剂注入法制备荷叶碱的磷脂-壳聚
            碱的质量浓度，g/L；V 为释放介质 PBS 溶液的体积，
                                                               糖自组装纳米粒，当大豆卵磷脂与壳聚糖质量比分
            即 100 mL；V 1 为每次取样的体积，即 1 mL。
                                                               别为 10∶1、20∶1、30∶1 和 40∶1 时，其包封率
                 采用 Korsmeyer-Peppas 模型（式 8）、Higuchi
                                                               分别为 18.31%、20.08%、19.86%和 19.42%。
            模型（式 9）、一级模型（式 10）和零级模型（式
                                                                   相关报道表明，磷脂-壳聚糖自组装纳米粒更适
            11）等释放动力学模型对荷叶碱释放曲线进行拟合，                                                        [19]        [20]
                           2
            计算相关系数 R ，探究荷叶碱释放曲线的最佳数学                           合包埋亲脂性药物，例如姜黄素                 、青蒿琥酯        、
                                                               戊酸二氟醚松      [21] 等，其包封率都在 80%以上；而对
            模型。
                                                               于亲水性的药物则包埋效果不理想，例如褪黑素的
                               CR   kt n             （8）
                                     1                         包封率不足 40%     [22] 、盐酸甲氧氯普胺的包封率不到
                             CR   k  t   c          （9）
                                                                 [8]
                                   2                           1% 。荷叶碱是一种正电荷亲脂性药物，包封率却
                          ln(100 CR)    kt   c    （10）
                                       3   1                   不理想。分析原因可能是荷叶碱在中性和碱性条件
                              CR   kt   c          （11）
                                    3   2                      下难溶于水，在酸性条件下却易溶于水，而在制备
            式中：t 为释放时间，h；k 1 、k 2 、k 3 为释放速率常数                 磷脂-壳聚糖自组装纳米粒时由于需要溶解壳聚糖，
                          –n
                                    –1
            （单位分别为 h 、h        –1/2 、h ）；c、c 1、c 2 为常数；n       必须保持溶液体系呈酸性，故在该溶液体系下，荷
            为扩散系数。                                             叶碱可视为水溶性物质。当溶解有荷叶碱和大豆卵
            1.10    数据处理                                       磷脂的无水乙醇注入壳聚糖溶液后，大豆卵磷脂和
                 样品平行检测 3 次。实验结果以平均值±标准偏                       壳聚糖通过静电作用相互结合时，大量的荷叶碱溶
            差表示，用 SPSS20.0 软件对数据进行单因素方差分                       解在水中而未被包埋，故造成了包封率低的结果。
            析，P<0.05 表示存在显著性差异。用 Origin  2017                  受到壳聚糖水相低 pH 的影响造成药物低包封率的
            进行绘图，并对数据进行拟合。                                     结果也有报道      [9,11] 。

                                                               2.2.2    修改的溶剂注入法下自组装纳米粒的包封率
            2    结果与讨论
                                                                   为了提高纳米粒的包封率，采用修改的溶剂注
            2.1   标准曲线的建立与专属性实验                                入法制备荷叶碱的磷脂-壳聚糖自组装纳米粒。当磷
                 荷叶碱标准品、空载纳米粒和荷叶碱-空载纳米                         脂与壳聚糖质量比分别为 10∶1、20∶1、30∶1 和
            粒混合物的高效液相色谱图如图 1 所示。空载的自                           40∶1 时，其包封率分别为 28.87%、30.43%、29.65%
            组装纳米粒在荷叶碱标准品的保留时间 16.417  min                      和 29.07%。
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