Page 148 - 《精细化工》2020年 第10期

·2078· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 37 卷

（B 相），梯度洗脱，流速为 1.0 mL/min，柱温为 RR/%   /   100 （2）
n 0
30 ℃，检测波长为 270 nm，进样量为 10 μL。梯度 式中：RR 为保留率，%；ρ′ 0 和 ρ n 分别为第 0 次和第
洗脱程序如下：0~15 min，A 相由体积分数为 20% n 次取样时荷叶碱的质量浓度，g/L。
提高到 80%；15~20 min，A 相体积分数由 80%提高 采用零级动力学（式 3）、一级动力学（式 4）
到 90%；20~25 min，A 相体积分数由 90%降至 20%； 和二级动力学（式 5）模型对荷叶碱的降解进行拟合。
25~35 min，A 相体积分数保持在 20%冲洗色谱柱。    kt （3）
0
另取空载自组装纳米粒和荷叶碱，用甲醇完全溶解 ln   ln   kt （4）
0
后在相同的液相条件下进样，考察自组装纳米载体 1  1  kt （5）
对荷叶碱测定的影响。以标准品浓度（c）为横坐标，  
0
峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线（质量浓度范 式中：ρ 0 和 ρ 分别为初始和 t 时荷叶碱的质量浓度，
–1
围 0.01~1.00 g/L ）。 得 到 荷叶碱的保 留时间 为 g/L，k 为反应速率常数，d ；t 为贮藏时间，d。
16.417 min。在 0.01~1.00 g/L 的范围，荷叶碱的线 1.8 消化稳定性评价
2
性方程为：Y=543.49c–19.679（R =0.999），具有良 参照文献[16]，取荷叶碱自组装纳米粒子样液(1
好的线性关系，符合检测要求。 mL)与模拟唾液按照体积比 1∶3 混合，混合液 pH
1.4 包封率的测定 调至 6.8，37 ℃下磁力搅拌 5 min；然后加入 6 mL
参照文献[12]采用超滤离心法测定包封率。总 模拟胃液，混合液 pH 调至 2.0，37 ℃下磁力搅拌
荷叶碱的测定为：将 1 mL 纳米粒子加入 10 倍体积 2 h；最后加入 6 mL 模拟肠液和 3 mL 胆汁，混合液
的甲醇超声 10 min 使其完全溶解，10000 r/min 离心 pH 调至 7.0，37 ℃下磁力搅拌 2 h。取胃消化和肠
10 min 后取上清液定容至 10 mL，测定总荷叶碱的 消化后的样品加入乙醇使酶灭活，40 ℃旋转蒸发将
含量。游离荷叶碱的测定：取上述等量纳米粒子溶 消化液蒸干，加 5 mL 稀盐酸（质量分数为 10%）
液于超滤离心管中，4000 r/min 离心 40 min，取外 溶解旋干的消化样液，用高效液相色谱仪进行检测。
管液体用甲醇定容至 10 mL，测定游离荷叶碱的含 模拟消化液的组成见表 1。

量，并按式（1）计算包封率。 表 1 模拟消化液的组成（100 mL）
EE / %  (1  /  ) 100 （1） Table 1 Composition of simulated digestive juices (100 mL)
1 0
式中：EE 为包封率，%；ρ 0 为总荷叶碱的质量浓度， 组成 唾液 胃液 肠液 胆汁
g/L；ρ 1 为游离荷叶碱的质量浓度，g/L。 无机溶剂 KCl NaCl NaCl NaCl
179.2 mg 550.4 mg 1.4024 g 1.0518 g
1.5 粒径及电位测定 （水
99 mL） NaH 2PO 4 NaH 2PO 4 KH 2PO 4 NaHCO 3
参照文献[13]，将荷叶碱自组装纳米粒子分散 177.6 mg 53.2 mg 16.0 mg 1.157 g
于 PBS 缓冲液（取购买的 PBS 缓冲液用超纯水稀释 NaCl KCl KCl KCl
59.6 mg 164.8 mg 112.9 mg 75.2 mg
10 倍），用纳米粒度仪测定纳米粒子的粒径和 Zeta Na 2SO 4 CaCl 2 CaCl 2 CaCl 2
电位。 114.0 mg 60.4 mg 30.2 mg 33.6 mg
NaHCO 3 NH 4Cl NaHCO 3
1.6 外形观察 338.8 mg 61.2 mg 0.6776 g
参照文献[14]，用超纯水将荷叶碱自组装纳米 浓 HCl（质量
粒子稀释 100 倍，样液滴加至电镜制样铜网，滴加 浓 HCl 分数 36.5%）
1.3 mL
质量分数为 2%的磷钨酸溶液染色，用滤纸吸干多余 36 μL
MgCl 2 10.0
染液，用透射电镜对纳米粒子进行形貌观察。 mg
1.7 贮藏稳定性评价 有机溶剂 尿素 40 mg 尿素 17 mg 尿素 20 mg 尿素 50 mg
（正辛醇
参照文献[15]，将制得的荷叶碱自组装纳米粒置 葡萄糖
1 mL） 130 mg
于室温（25 ℃）和低温（4 ℃）条件下避光贮藏，
将荷叶碱单体粉末分散于质量分数为 2%的羧甲基纤 葡萄糖醛酸
4 mg
维素钠（CMC-Na）悬浊液中作为对照，所有样品均 氨基葡萄糖

置于密闭的玻璃瓶内，每个样品平行测试 3 次，并 盐酸 0.66 mg
调节荷叶碱质量浓度为 100 mg/L。室温组分别于 0、 附加物 α-淀粉酶 牛血清白 牛血清白蛋 牛血清白
58 mg 蛋白 0.2 g 白 0.2 g 蛋白 0.2 g
3、6、9、12、15、18、21、24、27 和 30 d 取样检
测；低温组分别于 0、5、10、15、20、25、30、35、 尿酸 3 mg 胃蛋白酶 胰蛋白酶 胆酸 6.0 g
0.5 g
1.8 g
40、45 和 50 d 取样检测。荷叶碱的保留率按式（2） 脂肪酶 0.3 g
进行计算。 pH 6.8±0.2 1.3±0.2 8.1±0.2 8.2±0.2