Page 147 - 《精细化工》2020年 第10期
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第 10 期                        但   凡，等:  荷叶碱自组装纳米粒的制备与评价                                 ·2077·


                 荷叶生物碱类物质具有降脂减肥、抑菌抗病毒、                         团化学试剂有限公司。
                                          [1]
            抗氧化和抗敏等众多药理学作用 ，是荷叶成分中                                 超滤离心管（10 mL，截留相对分子质量 10000）、
            极具应用前景的物质之一。但是，荷叶生物碱也存                             MD45 透析袋（M W =7000），杭州雷琪实验器材有限
            在水溶性差、在生物体内消除速率快、半衰期短、                             公司；SB-C18 色谱柱（250 mm×4.6 mm，孔径 10 nm，
            口服生物利用率较低等缺点             [2-3] ，这些性质限制了荷           粒径 5 μm）、液相进样瓶（2 mL），美国安捷伦公司；
            叶生物碱的进一步应用。                                        Zetasizer Nano ZS90 纳米粒度分析仪，英国 Malvern
                 磷脂-壳聚糖自组装纳米粒是由带负电的磷脂                          公司；Thermo Ultimate 3000 高效液相色谱仪，美国
            和阳离子多糖（壳聚糖）通过静电作用自组装形成                             Thermo 公司；JEM-1010 透射电子显微镜，日本 JEOL
            的纳米载体，其具有脂质内核和由壳聚糖形成的正                             公司。
            电荷水化外壳结构，在制备过程中药物一般通过物                             1.2    方法
                                                     [4]
            理包埋或者静电作用等方式包埋在脂质内核 。由                             1.2.1    原始的溶剂注入法制备荷叶碱磷脂-壳聚糖
            于磷脂和壳聚糖均是具有良好生物相容性和可降解                                   自组装纳米粒
            性的材料，且其制备工艺简单、制备条件温和、对                                 参照文献[8]配制两种溶液：溶液一取质量比为
            疏水性物质包封率高、稳定性好，能延长药物在作                             20∶1 的大豆卵磷脂与荷叶碱，完全溶解于 8 mL 无
            用部位的滞留时间，促进药物的渗透吸收，提高生                             水乙醇中；溶液二由 10 mg 壳聚糖溶解于 92 mL 体
                     [5]
            物利用度 。所以，磷脂-壳聚糖自组装纳米粒成为                            积分数为 1%的乙酸溶液中制成。在磁力搅拌下将溶
            最受关注的药物辅料之一。                                       液一迅速注入溶液二，搅拌 1 h 得到自组装纳米粒，
                 水溶性维生素 E 是由维生素 E 琥珀酸酯与聚乙                      溶液 pH=2.7。调整大豆卵磷脂与壳聚糖的质量比分
            二醇 1000 通过酯化反应制得的维生素 E 的水溶性衍                       别为 10∶1、20∶1、30∶1 和 40∶1，以考察大豆
            生物，两亲性和较大的分子表面积使其成为出色的                             卵磷脂与壳聚糖不同质量比对包封率的影响。
            表面活性剂。在纳米载体的构建中，水溶性维生素                             1.2.2    修改的注入法制备荷叶碱磷脂-壳聚糖自组
                                                                     装纳米粒
            E 具有提高药物包封率﹑增加药物细胞渗透性﹑改
            善药物释放特性﹑提高生物利用度等优点                    [6-7] ，故而        参照文献[9-11]修改的溶剂注入法：先将 1.0  g
                                                               壳聚糖溶于 100 mL 体积分数为 1%的乙酸溶液中制
            水溶性维生素 E 在构建纳米载体的研究中备受重视。
                                                               得质量浓度为 0.1 g/L 的壳聚糖母液，然后取不同量
                 目前，关于构建纳米载体包埋荷叶碱从而改善
                                                               的母液用蒸馏水稀释至 92 mL 制成各种稀释液作为
            荷叶碱性质的报道较少，且现有的报道中用以包埋
                                                               溶液二；溶液一为 200 mg 大豆卵磷脂和 10 mg 荷叶
            荷叶碱的纳米载体存在成本高昂、制备工艺复杂、
                                                               碱完全溶解于 8 mL 无水乙醇中。在磁力搅拌下将溶
            推广难度大等不足。为此，本实验旨在建立一种成
                                                               液一迅速注入溶液二，搅拌 1 h 得到自组装纳米粒。
            本低廉、简单有效、易于推广的制备工艺以制备纳
                                                               调整大豆卵磷脂与壳聚糖的质量比分别为 10∶1、
            米载体来包埋荷叶碱，从而改善荷叶碱的特性。以
                                                               20∶1、30∶1 和 40∶1，以考察大豆卵磷脂与壳聚
            荷叶生物碱中的单体化合物荷叶碱为对象，分别采
                                                               糖不同质量比对包封率的影响。
            用原始和修改的溶剂注入法制备荷叶碱的磷脂-壳聚
                                                                   水溶性维生素 E 对包封率的影响：在修改的溶
            糖自组装纳米粒，以包封率为指标得到最佳制备工
                                                               剂注入法下，溶液一保持不变，溶液二为将壳聚糖
            艺，并对此工艺下制得纳米粒的贮藏稳定性、消化
                                                               母液用蒸馏水稀释至 92 mL 制成的稀释液，大豆卵
            稳定性和体外释放特性进行了研究。为荷叶生物碱
                                                               磷脂与壳聚糖的质量比为 20∶1，将水溶性维生素 E
            的进一步开发和应用提供了参考。
                                                               溶解于稀释液中。在磁力搅拌下将溶液一迅速注入
            1   实验部分                                           溶液二，搅拌 1  h 得到自组装纳米粒。调整溶液二
                                                               中水溶性维生素 E 的质量浓度分别为 5、10、15、
            1.1    试剂与仪器                                       20 g/L，以考察水溶性维生素 E 对包封率的影响。
                 荷叶碱单体（质量分数为 90%），西安景源生物                       1.3   标准曲线的建立与专属性实验
            工程有限公司；荷叶碱标准品（质量分数为 98%）、                              精密称取荷叶碱标准品并用甲醇溶解配制质量
            大豆卵磷脂（质量分数为 90%）、水溶性维生素 E（质                        浓度为 1  g/L 的荷叶碱标准品储备液，用甲醇稀释
            量分数为 99%）、PBS 缓冲液（pH=7.2）、壳聚糖、                     储备液至荷叶碱质量浓度分别为 0.01、0.02、0.10、
            肉豆蔻酸异丙酯、α-淀粉酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、                           0.50、1.00 g/L，过 0.22 μm 微孔滤膜后供液相色谱
            脂肪酶、胆酸、尿素、三乙胺等，AR，杭州启真湖                            仪分析。液相色谱条件为：色谱柱为 C18 柱，流动
            生物科技有限公司；甲醇、乙腈，色谱纯，国药集                             相为乙腈（A 相）和质量分数为 0.1%的三乙胺溶液
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