Page 163 - 《精细化工》2020年第11期
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第 11 期                       程翠林，等:  橙皮苷半合成香叶木苷及其抑癌作用                                   ·2309·


            DDQ 为脱氢剂经脱氢反应进行结构修饰获得香叶                            1.2.2   工艺参数优化
            木苷。针对影响转化率的主要因素（反应温度、反                                 重点对影响反应产率的 3 个工艺参数：原料配
            应时间与原料配比）设计不同工艺参数，以确定合                             比、反应温度与反应时间进行了探索。①回流温度：
            成反应的最佳操作参数。该工艺研究为香叶木苷合                             基于 1,4-二氧六环的沸点温度为 101.1  ℃，选取未
            成提供了新思路。同时，选取人体常见的 6 种癌细                           达沸点的 95  ℃与超过沸点的 110  ℃分别进行对比
            胞株为受试载体，探讨香叶木苷的抑癌效果，为扩                             研究，确定合适的反应加热温度范围。②反应时间：
            大香叶木苷作为抗癌药的应用提供科学依据。                               本实验在前期实验的基础上主要选取 12 h 与 6 h 进
                                                               行探索。③原料配比：根据质量守恒定律推断，本
            1    实验部分
                                                               反应中橙皮苷与 DDQ 的物质的量比为 1∶1，折合

            1.1   试剂与仪器                                        成质量比为 1.0∶0.4，于是选取质量比分别为 1.0∶
                 橙皮苷，质量分数>95%，源叶生物科技有限公                        0.1、1.0∶0.4、1.0∶0.8、1.0∶1.2、1.0∶1.6、1.0∶
            司；香叶木苷标准品，质量分数>98%，上海金穗生                           2.0 进行实验，探索原料质量比对产率的影响。
                                                               1.2.3   香叶木苷的纯化
            物科技有限公司；甲醇、1,4-二氧六环、DDQ，分
                                                                   粗产品采用二级纯化方法进行纯化。首先，选
            析纯，阿拉丁试剂（上海）有限公司；葡聚糖LH-20
                                                               取乙酸乙酯多次洗涤粗产品至清液无色，除去部分
            凝胶、RPMI-1640培养基、青链霉素混合液双抗，索
                                                               杂质。而后，采用湿法上样〔样品先用少量二甲基
            莱宝（北京）科技有限公司；胎牛血清、四甲基偶氮
                                                               亚砜（DMSO）溶解，再用少量甲醇稀释〕，选用葡
            唑蓝（MTT），Bio-Rad公司。
                                                               聚糖凝胶 LH-20 作为柱色谱的固定相，进行二次纯
                 U-3000 高效液相色谱仪（Acclaim C18 柱）、
                                                               化，洗脱剂为甲醇，流速为 10 s/滴，自动收集器收
            Thermo Scientific Forma CO 2 细胞培养箱，美国赛默            集 2 mL/管，HPLC 配合检测，合并含有香叶木苷的
            飞世尔公司；AB SCIEX Triple-TOF        TM  5600 型质谱
                                                               试管富集产品，低温旋蒸，冷水洗涤沉淀，干燥后
            仪，美国 SCIEX 公司；Waters Acquity UPLC BEH C 18
                                                               待检测。
            色谱柱（17 μm，21 mm × 100 mm），美国沃特世公
                                                               1.3    结构表征
            司；Avance 400 核磁共振波谱仪，瑞士布鲁克公司；
                                                                   HPLC 的检测条件：将产物溶于甲醇，稀释至
            Bio-Rad 全自动酶标仪，美国伯乐公司。
            1.2    方法                                          质量浓度为 1 g/L 的上样液。Acclaim C18 柱，柱温
            1.2.1   香叶木苷的合成                                    为 25  ℃，流动相为 V(质量分数 2%冰乙酸水溶液)∶
                 按 一 定 质量比 例， 准确称 取 1.0 g 橙皮苷                  V(甲醇)=7∶3 溶剂，流速 1.0 mL/min，检测波长 275
            （1.64 mmol）和 0.4 g（1.76 mmol）或 0.1、0.8、            nm。
            1.2、1.6、2.0 g DDQ 于圆底烧瓶，加入 20 mL 1,4-                  UPLC-MS 检测条件：上样液质量浓度 1 g/L。
            二氧六环，水浴/油浴锅中恒温回流反应 6~12 h。冷                        液相条件 0~5 min，95% A + 5% B；5~10 min，85%
            却至室温，真空抽滤，滤液减压浓缩后，干燥称重                             A + 15% B；10~13 min，70% A + 30% B；13~
            备用，按公式（1）计算产率。产品纯度则采用 HPLC                         13.1 min，50% A + 50% B；13.1~15 min，95% A + 5%
            峰面积归一法进行测定。反应路线如下所示：                               B（以上百分数是体积分数，其中 A：质量分数 0.1%
                                 产物干重                          甲酸水溶液；B：质量分数 0.1%甲酸乙腈溶液）。
                       产率   / %             100       （1）
                                橙皮苷质量                          流速 0.3 L/min。质谱检测条件为：采用 ESI 离子源，
                                                               离子化模式为电喷雾正离子模式，数据采集范围
                                                               m/Z 100~650；正离子源电压(ISVF) 5500 V，离子源
                                                               温度为 550  ℃，裂解电压（DP）分别为 100 V/
                                                               –100 V，碰撞能量（CE）分别为 40 eV/–40 eV，扩
                                                               展碰撞能（CES）分别为 15 eV/–15 eV。雾化气体
                                                               为氮气，冷却气、反吹气及气帘气压力分别是 379.2、
                                                               379.2、241.3 kPa。一 级质 谱母离子扫 描范围 为
                                                               100~1500，IDA 设置响应值超过 100 cps 的 8 个最
                                                               高峰进行二级质谱扫描，离子扫描范围为 80~1500，
                                                               开启动态背景扣除（DBS）。数据采集软件：Analyst
                                                               TF 1.6 软件（AB SCEIX，USA）；数据处理软件系
                                                               统： Peakview v2.2、 Masterview v1.1 软件（ AB
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