Page 110 - 《精细化工》2020年第4期

·744· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 37 卷

1.2.5.2 LDL 氧化修饰孵育 200 μL 样液（GYP-1、GYP-2 及 BHT），混匀，37 ℃
LDL 氧化孵育实验设置表 2 所示。以下各组中 恒温孵育 24 h，在 200~400 nm 内扫描，从整体反应
LDL 浓度和体积相同，甲醇和 BHT 及栀子样液体 GYP 抑制 LDL 氧化修饰程度 [17] 。
积相同，去离子水和 CuSO 4 ·5H 2 O 溶液的体积相同。 1.2.5.8 氧化前后 LDL 微观结构观察
本文 LDL 及各试剂浓度均为其在混合体系中的终 按照 1.2.5.7 节方法稍 加修改 ，分 别添加
浓度。 100 mg/L GYP-1、GYP-2 及 BHT 孵育 48 h，装入截
留相对分子质量为 50000 的透析袋中，用去离子水
表 2 LDL 氧化实验设置 搅拌充分透析 48 h 以除净盐离子，冷冻干燥获得不
Table 2 Experimental design of LDL oxidation
同氧化程度的 LDL 粉末，取少量粉末在离子溅射仪
组别 氧化底物 样液 氧化剂或替代物
中完成真空喷镀后用扫描电子显微镜进行表面微观
空白组（n-LDL） L D L 甲醇 去离子水 [21]
分析 。
促氧组（ox-LDL） L D L 甲醇 C u S O 4·5H 2O
1.3 数据分析
阳性对照组（BHT） LDL BHT CuSO 4·5H 2O
所有实验均为 3 次重复后以平均值±标准差表
样液组 LDL GYP-1/GYP-2 CuSO 4·5H 2O
示，采用 DPS7.05 软件进行显著性差异分析。
1.2.5.3 GYP-1 抑制 LDL 氧化修饰中共轭二烯
（CD）产生量的测定 2 结果与讨论
根据江慎华 等 [19] 的文献方法稍加修 改。在 2.1 大孔吸附树脂动态筛选
pH=7.4 环境中，取 9.8 mL LDL 溶液（200 mg/L）， 为得到品质较好、符合不同市场需求的 GYP，
加 100 μL CuSO 4·5H 2O （50 μmol/L）或去离子水，然 需要对 GYP 粗提液去杂纯化。结合实验室预实验结
后加 100 μL 样液（不同浓度 GYP-1 及阳性对照 果及国内 GYP 主要树脂生产厂家推荐，确定了 10
BHT），充分混匀，37 ℃恒温水浴孵育 60 min，测 种吸附 GYP 代表性树脂进行动态吸附与解吸筛选
定 234 nm 处吸光度。 实验，各种树脂详细参数如表 3 所示，筛选结果如
1.2.5.4 GYP-1 抑制 LDL 氧化修 饰中丙二醛 图 1、2 所示。
（MDA）产生量的测定
采用 GARCÍA 等 [20] 的方法稍加修改。在 pH=7.4 表 3 10 种大孔树脂的物理特性
环境中，取 800 μL LDL 溶液（3.2 g/L），添加 100 μL Table 3 Physical properties of ten macroporous resins
2
CuSO 4 ·5H 2 O（300 μmol/L）或去离子水，加入 100 μL 树脂类型 比表面积/(m /g) 平均孔径/nm 极性 w（水）/%
样液（不同浓度 GYP-1 及 BHT），混匀，37 ℃恒温 AB-8 480~520 13.0~14.0 弱极性 65~75
水浴孵育 24 h。取上述孵育体系 1 mL，加入 50 μL HPD-722 485~530 13.0~14.0 弱极性 65~75
HPD-100 650~700 8.5~9.0 非极性 65~75
质量分数为 1% EDTA-2Na 终止氧化，再加入质量分
LS-300 >500 20~30 非极性 60~70
数为 15%三氯乙酸 2 mL 沉淀蛋白，最后加入质量分
LS-300B >500 20~30 弱极性 65~75
数 0.67% TBA 2 mL 显色，沸水浴 35 min 后迅速冷却
LX-21 — — 弱极性 —
至离心 10 min，取上清液于 532 nm 处测吸光度。
LX-68 >900 — 非极性 63.7
1.2.5.5 纯化前后 GYP 抑制 LDL 氧化修饰中 CD 动 XAD-7HP 500 — 弱极性 61~69
力学的比较 NKA 570~590 20.0~22.0 非极性 62~72
按照 1.2.5.3 节方法，加入 12.5 mg/L GYP-1、 HPD-200A 700~750 8.5~9.0 非极性 65~75
GYP-2 和 BHT 样液，每 60 min 测定 234 nm 处吸光 注：—表示相关参数信息不详。
度，绘制 CD 动力学曲线。

1.2.5.6 纯化前后 GYP 抑制 LDL 氧化修饰中 MDA 大孔树脂的筛选应从树脂对目标成分的吸附
产物动力学的比较 量、吸附率、解吸率等因素综合考虑。GYP 是弱极
按照 1.2.5.4 节方法，测定 75 mg/L GYP-1、 性物质，所以，从水溶液中吸附 GYP 用非极性或弱
GYP-2 在 24、48、72、96 h 内 MDA 产生量。 极性大孔吸附树脂较为适合 [22] 。由图 1、2 可以看出，
1.2.5.7 紫外-可见全波长范围扫描表征 GYP-1、 NKA、LX-21、AB-8、LS-300 吸附率都在 90%以上，
GYP-2 抑制效果 NKA 树脂吸附量、解吸率明显高于其他树脂，分别
取 19.6 mL LDL 溶液（500 mg/L），加入 200 μL 为 48.11 mg/g、90.77%。综合吸附率、吸附量、解
CuSO 4 ·5H 2 O（1.25 μmol/L）或去离子水，然后加入 吸率，选取 NKA 大孔树脂进行后续优化实验。