Page 113 - 《精细化工》2020年第4期
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第 4 期 曹亚楠,等: 栀子黄色素富集纯化对其抑制 LDL 氧化修饰的影响 ·747·
从而将 GYP 洗脱出来。增加流速,缩短了洗脱液与 由图 8 可知,随着洗脱剂乙醇体积分数增加,
树脂的接触时间,使一部分 GYP 溶液未被洗脱出 NKA 大孔树脂对 GYP 的解吸能力增强、洗脱曲线
来,解吸率因此降低 [17] 。因此,考虑时间、洗脱效 变高变窄,体积分数为 80%的乙醇溶液洗脱曲线对
率等因素,选择 2 BV/h 为 GYP 最佳洗脱流速。 称,且无明显拖尾现象。这是因为 GYP 的主要成分
2.3.4 GYP 洗脱剂体积分数及用量的确定 藏花素具有糖苷键,在水溶液中极性较弱,且与乙
洗脱剂体积分数及洗脱剂用量对解吸效果的影 醇相似,所以易被乙醇溶液洗脱出来 [26] 。因此,选
响见图 8。 择体积分数为 80%的乙醇溶液作为洗脱剂。
由图 8 还可知,确定洗脱乙醇体积分数为 80%后,
当洗脱剂用量为 3 BV 时,流出液中 GYP 浓度已趋
于平衡,增大洗脱液体积,解吸变化不明显。因此,
选取 3 BV 体积分数为 80%的乙醇溶液洗脱 GYP。
2.4 GYP 纯化前后各理化性质的测试与比较
2.4.1 纯化前后 GYP 主要成分分析
GYP 纯化前后主要成分测定结果见表 5。
表 5 显示,纯化后 GYP-2 主要成分藏花素质量
分数及色价由纯化前的 5.59%、41.05 分别提高到
34.89%、252,而 OD 1 、OD 2 则分别降低到 0.69、0.684,
达到了较好的富集效果,为后续研发不同系列 GYP
图 8 洗脱剂体积分数及洗脱剂用量对解吸效果的影响
Fig. 8 Effect of eluent concentration and dosage on the desorption 产品提供了依据。
表 5 GYP 主要成分测定
Table 5 Determination of main components of GYP
w(藏花素)/% w(栀子苷)/% w(绿原酸)/% OD 1 O D 2 色价
a
b
a
b
b
b
GYP-1 5.59±0.01 44.65±0.35 6.47±0.02 2.65±0.003 1.01±0.002 41.05
GYP-2 34.89±0.24 a 68±0.22 25.18±0.17 0.69±0.009 0.684±0.008 252 a
a
a
b
b
注:表中同列数据后不同小写字母表示不同样品主要成分含量差异显著(P<0.01)。
2.4.2 纯化前后 GYP 紫外、可见全波长扫描 2.4.3 纯化前后 GYP 颜色表征
GYP 纯化前后光谱扫描结果见图 9。由图 9 可 在 2.4.1、2.4.2 节表征 GYP 纯化前后含量差异
看出,GYP-1 溶液有 3 个明显的吸收峰。杂质栀子 的基础上,进一步采用色差仪比较 GYP 纯化前后色
苷的特征吸收峰在 238 nm 处(峰 1),杂质绿原酸 度的差别,通过颜色表征更直观地说明 GYP 纯化效
的特征吸收峰在 325 nm(峰 2),GYP 主要成分藏 果。GYP 色泽测定结果见表 6,GYP-1、GYP-2 的
[9]
*
花素和藏花酸的特征吸收峰在 440 nm 处(峰 3) 。 色差分析见图 10。由表 6 可见,GYP-1 的 a 为-2.00,
*
纯化后 GYP-2 主要有效成分藏花素、藏花酸吸收峰 b 为正值,从图 10 中可直观看出 GYP-1 溶液偏黄
明显增高、纯度显著提高,而栀子苷的吸收峰强度 绿色,可能是因为栀子苷含量多,造成 GYP 发生绿
*
*
显著降低。说明纯化前 GYP-1 溶液中含有的大量栀 变。GYP-2 的 a 、b 值分别比 GYP-1 高 24、16,图
子苷等杂质在纯化过程中被除去,GYP 纯度得到显 10 中显示色相为红黄色,其 E * 比 GYP-1 高 24.13,
著提高。 表明 GYP-2 与参照组差异更大,颜色更深、纯度更
高。因 GYP 中显色成分主要是藏花素,浓度升高,
GYP 溶液会由黄色变成红色,与上述结果一致,说
明纯化后的 GYP 达到了富集效果。
表 6 GYP 色泽测定
Table 6 Determination of GYP color
L * a * b * E 深浅 色相 艳度
*
84.89 2.00 43.15 33.53 偏深 偏绿黄 偏艳
GYP-1 a b b b
±0.16 ± 0.06 ±1.9 ±1.86
72.1 22.06 59.63 57.66 偏深 偏红黄 偏艳
GYP-2 b a a a
±0.18 ±0.15 ±0.55 ±0.57
图 9 GYP 纯化前后光谱扫描 注:表中同列数据后不同小写字母表示样品外观色泽差异
Fig. 9 Scanning spectra of non-refined and refined GYP 显著(P<0.01)。