Page 178 - 《精细化工》2020年第6期

·1244· 精细化工 FINE CHEMICALS
器待测，以空铝坩埚作为对照。加热温度范围为
5~80 ℃，升温速率为 5 ℃/min，氮气流速为 5 mL/min。
按照公式（1）计算结晶度 CI(%) [20] ：
 H
CI / %  1  100
 H  w
2
式中： ΔH 1 为脂质纳米囊中固体脂质的熔化焓，J/g；
ΔH 2 为纯固体脂质的熔化焓，J/g；w 为脂质纳米囊
中固体脂质的质量分数，%。
1.3.5 CoQ10-脂质纳米囊的闭合效应
根据文献[21]的方法进行一定改进，测定不同
质量分数固体脂质的 CoQ10-脂质纳米囊的闭合因
子。在 30 mL 样品瓶中加入 20 g 去离子水，用滤纸
将其封口，并将 300 μL 的样品均匀涂抹在滤纸表面，
于 37 ℃培养箱中放置 48 h。分别在 8、24、48 h 测定
样品瓶中水的减少量，以水代替样品均匀涂抹在滤纸
上作为对照，根据公式（2）计算闭合因子 F（%）：

AB
F /%   100
A 2.1
式中：A 为涂抹水的对照组样品瓶中水的减少量，g；
B 为涂抹样品的实验组样品瓶中水的减少量，g。
1.3.6 高效液相色谱法（HPLC）测定 CoQ10 的含量
采用高效液相色谱法测定 CoQ10 的含量，色谱
条件为：C18 柱，150 mm×4.6 mm×5 μm；流动相
V（甲醇）∶V（乙醇）=1∶1，流速 1.0 mL/min，
检测波长为 275 nm，进样量为 20 μL，柱温为 35 ℃。
1.3.7 CoQ10-脂质纳米囊的体外透皮实验
取一块完整无损伤的猪皮，用镊子将其表面的
细毛处理干净，并用手术刀将其皮下脂肪除去；用
磷酸盐缓冲液（PBS）对其进行洗涤，然后用锡纸
包裹并置于–20 ℃冰箱中冷藏待用。
将处理过的猪皮置于 pH=7.4 的 PBS 中解冻
30 min；然后，将其置于 Franzs 扩散池的供给池与
接收池之间；在 pH=7.4 的 PBS 溶液中加入一定量
的吐温 80 使其质量分数为 5%，并将其加入接收池
中；在供给池中加入 0.5 mL 脂质纳米囊；将其放入
透皮扩散试验仪中，设置实验温度为 37 ℃，搅拌
速度为 600 r/min，反应时间为 12 h。
反应结束后，取出猪皮，用脱脂棉除去猪皮表
面残留的样品，采用 Tape stripping 法 [22-23] 测定表皮
中 CoQ10 的含量：用 3M 胶带粘贴猪皮 21 层,除去
第一层，将其余 20 层收集于离心管中，加入 2 mL
萃取剂异丙醇，超声 30 min；采用冷冻离心机于
5000 r/min 离心 10 min；取下层萃取液，用 220 nm
有机膜过滤后采用 HPLC 测定 CoQ10 的含量，即为
表皮中 CoQ10 的含量。
将用 3M 胶带处理后剩余的猪皮剪碎处理，收
第 37 卷
集于离心管中，加入 2 mL 萃取剂异丙醇，超声
30 min；采用冷冻离心机于 5000 r/min 离心 10 min；
取上清液，用 220 nm 有机膜过滤后采用 HPLC 测定
CoQ10 的含量，即为真皮中 CoQ10 的含量。
（1）
1.3.8 激光共聚焦显微镜观察猪皮截面
在油相中加入质量分数为 0.0001%的尼罗红染
料，采用 1.2.1 节的方法制备得到含有尼罗红的
CoQ10-脂质纳米囊。将其用于透皮实验，实验结束
后，剪下适宜宽度的猪皮，用冰冻切片包埋剂将其
包裹，冷冻后用冷冻切片机将其切成 20 μm 的薄片，
采用激光共聚焦显微镜观察其截面（尼罗红激发波
长：488 nm，发射波长：571~741 nm）。
1.4 数据处理
采用 SPSS20.0 软件中的单因素 ANOVA 等方法
进行数据分析（相关性系数 P<0.05）。
2 结果与讨论
（2）
不同质量分数固体脂质的 CoQ10-脂质纳米囊
的制备及储藏稳定性
研究表明固体脂质的添加能够促进活性成分的
透皮吸收 [16-19] 。因此，为进一步提高脂质纳米囊对
CoQ10 的经皮输送，在 CoQ10-脂质纳米囊中添加了
固体脂质并对其稳定性进行了测试，结果如图 1、2
所示。图 1、2 中，CoQ10-脂质纳米囊呈现较好的
球形，分散均匀，不同质量分数固体脂质的 CoQ10-
脂质纳米囊没有明显区别（以 CoQ10-CP-0、CoQ10-
CP-95%举例分析），粒径均为 52 nm 左右，这与吴
丽娜等 [24] 所研究的 CoQ10-纳米结构脂质载体相比，
粒径显著降低，有利于活性物的透皮吸收 [25] ；放置
180 d 后不同质量分数固体脂质的 CoQ10-脂质纳米囊
的外观及粒径均无明显变化，具有良好的储藏稳定性。