Page 95 - 《精细化工》2020年第9期

第 9 期 刘庆宇，等: 基于 1,8-萘酰亚胺检测细胞内肼的荧光探针 ·1809·

探究探针 NH1 适用的 pH 范围，在 pH 4~11 范围内，
测试了探针 NH1（10 μmol/L）的荧光强度，结果见
图 6。如图 6 所示，在未加入肼时，并未观察到探
针 NH1 有明显的 pH 依赖性荧光变化，在整个测试
范围的荧光强度较为平稳。而在加入肼后，探针 NH1
在 pH 4.5~10.5 范围内显示出较强且相对稳定的荧
光信号，有利于定量检测肼。这表明该探针有着较
好的 pH 适应能力。

图 3 探针 NH1（10 μmol/L）在 535 nm 处的荧光强度与
肼浓度的线性相关曲线〔V（乙醇）∶V（PBS）=1∶
1，pH=7.4，λ ex =397 nm〕
Fig. 3 Linear correlation curve between the fluorescence
intensity of probe NH1 at 535 nm and hydrazine
concentrations [V(ethanol)∶V(PBS)=1∶1, pH = 7.4,
λ ex =397 nm]

2.4 NH1 对肼的选择性和抗干扰能力
良好的选择性和抗干扰能力是探针必须具备的

+
2+
2+
2+
2+
+
性质。探究了 NH1（20 μmol/L）对肼以及多种氨基 1—空白； 2—Ca ；3—Na ；4—K ；5—Ba ；6—Ni ； 7—Mg ；
+
3+
–
–
–
–
酸（50 μmol/L）的响应情况，结果见图 4。如图 4 8—Fe ； 9—NH 4 ；10—Cl ；11—Br ；12—F ；13—HSO 3 ；
–
–
–
3–
2–
14—NO 3 ；15—PO 4 ；16—S 2O 7 ；17—CH 3COO ；18—ClO 4 ；
所示，探针的荧光强度仅在肼加入时发生了明显的 –
19—HS
变化。为了探究阴、阳离子（250 μmol/L）对探针 图 5 各种离子（250 μmol/L）对探针 NH1（10 μmol/L）
NH1（10 μmol/L）是否会产生干扰，研究了探针在 检测肼（50 μmol/L）的干扰情况
不同阴、阳离子存在下对肼的响应变化，结果见图 Fig. 5 Fluorescence intensity of probe NH1 (10 μmol/L) in
the presence of different ions (250 μmol/L) response to
5。如图 5 所示，探针在几种离子的干扰下荧光强度 hydrazine (50 μmol/L)
变化不大，并且能完成对肼的特异性响应。结果表明，

探针 NH1 有着良好的选择性和抗干扰能力。

1—空白；2—肼；3—半胱氨酸；4—同型半胱氨酸；5—缬氨酸； 图 6 不同 pH 下肼（40 μmol/L）对探针 NH1（10 μmol/L）
6—精氨酸；7—苯丙氨酸；8—丙氨酸；9—蛋氨酸；10—甘氨酸； 在 535 nm 处荧光强度的影响
11—谷氨酰胺；12—异亮氨酸；13—丝氨酸；14—苏氨酸；15— Fig. 6 Fluorescence intensity at 535 nm of NH1 (10 μmol/L)
天门冬氨酸；16—异亮氨酸；17—组氨酸；18—赖氨酸；19—酪 at different pH in the presence of hydrazine
氨酸；20—色氨酸 (40 μmol/L)

图 4 各种氨基酸（50 μmol/L）对探针 NH1（20 μmol/L）
荧光强度的影响 2.6 NH1 响应时间测试
Fig. 4 Effects of various amino acids (50 μmol/L) on the 通过测试探针溶液加入肼之后荧光谱图随时间
fluorescence intensity of probe NH1 (20 μmol/L) 的变化可以得到探针对肼的响应时间，结果见图 7。

2.5 pH 对 NH1 检测肼的影响 如图 7 所示，加入肼后，最大发射波长 535 nm 处的
探针除了良好的选择性和抗干扰能力之外，其 荧光强度迅速增强，并在 80 s 达到平台。由此可见
pH 的适用范围也会影响其在生物体内的应用。为了 探针 NH1 对肼有着较快的响应速度。