Page 150 - 《精细化工》2020年第2期

·352· 精细化工 FINE CHEMICALS
提取花色苷
提取率 /%   100
果渣中总花色苷
式中：提取花色苷，mg；果渣中总花色苷，mg。
1.3 DESs 及提取参数对花色苷提取率的影响
精确称取约 2.0 g 桑葚果渣粉末，用相应溶剂提
3
取 3 次。以 5.0×10 r/min 离心 15 min 后，合并上清
液并相应稀释以进行进一步分析。采用不同的提取
溶剂与提取参数，对花色苷的提取率进行了比较。
1.3.1 料液比的影响
按料液比（g∶mL，下同）为 1∶10、1∶15、1∶
20、1∶25，以 V(浓盐酸)∶V(乙醇)∶V(水)=0.1∶
40.0∶59.9 为提取溶剂，25 ℃下超声波辅助提取
（400 W，15 min）。
1.3.2 提取溶剂的影响
制备了不同类型的 DESs，并对桑葚果渣花色苷
进行了提取。将 HBD 和 HBA 在 80 ℃水浴中混合
加热，直至形成黏稠状透明液体，然后加入适量的
水，制备 DESs。以水、体积分数为 70%乙醇水溶液
体积分数为 70%甲醇水溶液 [29] 和体积分数为 70%丙
酮水溶液 [30] 提取花色苷作为对照。料液比设为 1∶
20，为防止部分 DESs 体系在室温下结晶，于 40 ℃
下超声波辅助提取（400 W，15 min）。
1.3.3 辅助提取方法的影响
按 n(氯化胆碱)∶n(草酸)=1∶1，水体积分数为
30%，制备 DESs 提取溶剂，料液比为 1∶20，于 25 ℃
下比较机械振荡辅助提取（240、270、300 r/min，
15 min）和超声波辅助提取（400、450、500 W，
15 min）。
1.3.4 提取温度的影响
花色苷的热稳定性较差，通常在 70 ℃ [31] 以上
会被破坏，所以考察不同温度（25、40、50 和 60 ℃）
对花色苷提取效果的影响。其他条件控制如下：
DESs 为 n(氯化胆碱)∶n(草酸)=1∶1，水体积分数
为 30%；料液比 1∶20，超声波辅助提取（400 W，
15 min）。
1.3.5 提取时间的影响
比较了不同提取时间（10、15、20 min）对桑
葚果渣中花色苷的提取效果。其他条件控制如下：
DESs 为 n(氯化胆碱)∶n(草酸)=1∶1，水体积分数
为 30%；料液比 1∶20，40 ℃下超声波辅助提取
（400 W）。
1.4 从 DESs 提取物中回收花色苷
采用大孔树脂 HP-20、X-5、LX-38 和聚酰胺去
除 DESs，回收 DESs 提取物中的花色苷。所有吸附
载体在体积分数为 95%乙醇水溶液中浸泡过夜。然
后，将 40 mL 吸附载体装载至玻璃层析柱中，用
100 mL 去离子水冲洗至无醇味；随后，将 5 mL 的
第 38 卷
DESs 提取物装载到层析柱中，用 150 mL 去离子水
（1）
洗涤，至洗脱液的 pH 变为中性；然后依次用 200 mL
溶剂〔V(浓盐酸)∶V(乙醇)∶V(水)=0.1∶30.0∶
69.9〕和 100 mL 溶剂〔V(浓盐酸)∶V(乙醇)∶V(水)=
0.1∶70.0∶29.9〕洗脱，分别收集洗脱液，于 55 ℃
下旋蒸，得到最终的提取产物为深紫色粉末并精确
称量。为了测量回收率，用体积分数为 70%的乙醇
水溶液将花色苷粉末溶解定容至 10 mL，取 500 μL
用相应的 pH 1.0 和 pH 4.5 缓冲溶液稀释定容至
10 mL，如 1.2 节所述，采用 pH 示差法测定。回收
率用式（2）计算：
回收的总花色苷
回收率 /%   100 （2）
DESs提取的总花色苷
式中：回收的总花色苷，mg；DESs 提取的总花色
苷，mg
1.5 花色苷纯度测定
从 1.4 节中取 500 μL 用体积分数为 70%的乙醇
[28] 、 水溶液溶解花色苷粉末溶液，于 50 ℃下旋蒸，用
V(甲醇)∶V(浓盐酸)=99∶1 的溶液 1 mL 重新溶解，
[31]
通过 0.22 μm 有机滤膜，参照 YANG 等 所述的方
法，进行高效液相色谱-质谱（HPLC-MS）和高效液
相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-DAD）分析，
根据花色苷的紫外光谱、保留时间、质谱和文献数
据 [4,32-34] ，并采用商业标准品进行加标法定性，对提
取物中的花色苷进行了鉴定，采用外标法进行定量。
以相应标准品的校准曲线为外标，对 3 种花色
苷（矢车菊素-3-O-葡萄糖苷、矢车菊素-3-O-芸香糖
苷、矢车菊素）进行了定量分析。产品纯度按提取
粉末中 3 种花色苷总量的百分比计算，并计算产物
中总花色苷的质量分数。
1.6 数据分析
使用 SPSS 16.0.1（SPSS Inc.，芝加哥，伊利诺
伊州，美国）进行统计分析。用方差分析法研究了
不同工艺参数对花色苷提取率、回收率和纯度的影
响。Duncan 检验用于对样本进行多重比较，P<0.05
表示存在显著差异。
2 结果与讨论
2.1 DESs 与提取参数对提取率的影响
2.1.1 料液比的筛选
按 1.3.1 节实验方法，测定了料液比对花色苷提
取率的影响，见图 1。由图 1 可知，当料液比从 1∶
10 增加到 1∶20 时，提取率显著提高（P<0.05）。
然而，料液比进一步增加到 1∶25 时，其对提取率
没有显著影响（P>0.05）。因此，选择最佳料液比为
1∶20。