Page 140 - 《精细化工》2021年第6期

·1202· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 38 卷

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215.3~217.2 ℃。 HNMR (600 MHz, DMSO-d 6 ), δ: 抑制率/%=[(A 0 –A 1 )–(A 2 –A 1 )]/(A 0 –A 1 )×100 （1）
8.25 (s, 1H), 7.79 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.67 (d, J = 8.6 式中：A 2 为待测化合物和酶液都含有的溶液吸光度；
Hz, 2H), 7.25 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.88 (d, J = 8.7 Hz, A 0 为待测化合物用磷酸缓冲液代替的溶液吸光度；
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2H), 3.94 (s, 2H), 3.72 (s, 3H); CNMR (151 MHz,
DMSO-d 6 ), δ: 164.8, 159.5, 159.4, 158.3, 154.0, A 1 为待测化合物和酶液都用磷酸缓冲液代替的溶液
136.6, 136.4, 132.4, 131.4, 130.4, 129.8, 127.3, 117.8, 吸光度。
113.9, 55.1, 35.7; HRMS (ESI), C 20 H 14 ClN 3 O 3 S, m/Z: 1.4 分子对接
+
[M+H] 理论值 412.0517；测试值 412.0515。 分子对接可以形象地说明化合物分子与蛋白
6-(4-甲氧基苄基)-2-(4-甲氧基苯亚甲基)-2H-噻 的结合模式，分析结合位点和相互作用力，为实验
唑并[3,2-b]-1,2,4-三嗪-3,7-二酮（Ⅴk）：产率 53.2%， 提供了可靠的理论信息 [17] 。以重组人源乙酰胆碱酯
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m.p.=222.1~223.8 ℃。 HNMR (600 MHz, DMSO-d 6), 酶与多奈哌齐的晶体复合物（PDB 编号：6O4W）为
δ: 8.20 (s, 1H), 7.75 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.24 (d, J = 模板，删除了多奈哌齐、水分子和金属离子，只保留
8.3 Hz, 2H), 7.17 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.87 (d, J = 8.4
Hz, 2H), 3.93 (s, 2H), 3.86 (s, 3H), 3.72 (s, 3H); 了酶链，添加了氢原子。Autodock 软件 4.2 用于分
13 CNMR (151 MHz, DMSO-d 6), δ: 164.9, 162.2, 159.6, 子对接过程。用 PyMol 程序观察配体-受体复合物。
159.5, 158.3, 153.9 138.2, 133.3, 130.4, 127.5, 125.1,
115.4, 113.9, 113.5, 55.8, 55.2, 35.8; HRMS (ESI), 2 结果与讨论
+
C 21 H 17 N 3 O 4 S, m/Z: [M+H] 理论值 408.0103；测试值
408.0102。 2.1 中间体的合成
6-(4-甲氧基苄基)-2-(3-甲基苯亚甲基)-2H-噻唑 在中间体制备过程中，首先以氟或甲氧基取代
并[3,2-b]-1,2,4-三嗪-3,7-二酮（Ⅴl）：产率 55.8%， 的苯甲醛和 N-乙酰甘氨酸为原料，经 Erlenmeyer-
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m.p.=204.2~205.7 ℃。 HNMR (600 MHz, DMSO-d 6), Plöchl 反应，分子内缩合得到中间体Ⅰ，再经水、
δ: 8.19 (s, 1H), 7.56 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 7.49 (t, J = 丙酮水解得到中间体Ⅱ，中间体Ⅱ在盐酸水溶液中
8.0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.25 (d, J = 进一步水解得到中间体Ⅲ，最终跟硫代氨基脲在碱
8.6 Hz, 2H), 6.88 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.94 (s, 2H), 3.72
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(s, 3H), 2.40 (s, 3H); CNMR (151 MHz, DMSO-d 6 ), 性溶液中缩合得到关键中间体Ⅳ，每一步中间体的
δ: 165.0, 159.5, 159.5, 158.3, 153.9, 139.2, 138.1, 反应都具有条件温和、产率高、后处理简单特点，
132.6, 132.6, 131.3, 130.4, 129.6, 127.9, 127.3, 116.9, 水洗抽滤即可。
113.9, 55.1, 35.7, 21.0; HRMS (ESI), C 21 H 17 N 3 O 3 S, 目标化合物Ⅴa~Ⅴm 合成过程中，以中间体Ⅳ、
+
m/Z: [M+H] 理论值 392.1063；测试值 392.1068。
溴代乙腈和各种取代的苯甲醛为原料，尝试采用不
6-(4-甲氧基苄基)-2-(3-溴苯亚甲基)-2H-噻唑并
同催化剂和溶剂进行合成反应，结果表明，以对甲
[3,2-b]-1,2,4-三嗪-3,7-二酮（Ⅴm）：产率 64.4%， 苯磺酸为催化剂，N,N-二甲基甲酰胺（DMF）为溶
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m.p.=214.7~215.9 ℃。 HNMR (600 MHz, DMSO-d 6),
δ: 8.24 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.77 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 剂，回流反应，最终产物收率 35%；以乙醇为溶剂，
7.74 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.56 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.25 浓硫酸为催化剂，收率有所提高达到 55%；以冰乙
(d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.86 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.93 (s, 酸为溶剂，收率最高可达到 65%。反应温度不能超
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2H), 3.73 (s, 3H); CNMR (151 MHz, DMSO-d 6 ), δ: 过 100 ℃，不然会有副产物出现，收率下降。
165.0, 159.5, 159.4, 158.3, 153.9, 139.2, 138.1, 132.5,
132.5, 131.3, 130.3, 129.6, 127.8, 127.2, 116.9, 113.9, 2.2 体外 AChE 抑制活性测定
55.1, 35.7; HRMS (ESI), C 20 H 14 BrN 3 O 3 S, m/Z: 测试了化合物Ⅴa~Ⅴm 的体外 AChE 抑制活性，
+
[M+H] 理论值 456.0012；测试值 456.0012。 初步抑制活性测试结果如表 1 所示。由表 1 可知，
1.3 生物活性测试 从Ⅴa~Ⅴm 的体外 AChE 抑制率来看，6 位苯环上
采用 Ellman 法对目标化合物进行体外 AChE 抑 供电子取代基比吸电子取代基的抑制率高。如 6 位
制活性测试 [16] ，用碘化乙酰胆碱为底物，5,5′-二硫 苯环上连接甲氧基的Ⅴh、Ⅴi、Ⅴk、Ⅴl、Ⅴm 抑制
双(2-硝基苯甲酸)为显色剂。首先在 96 孔板上加入 率分别为 78.0%±3.7%、46.7%±2.8%、80.1%±3.1%、
用二甲基亚砜（DMSO）溶解的浓度为 1 mmol/L 待 66.2%±3.4%、53.5%±4.4%，而 6 位苯环上连接氟的
测化合物 10 μL、0.05 U/mL 重组人源乙酰胆碱酯酶 Ⅴa、Ⅴb、Ⅴc、Ⅴd、Ⅴe 抑制率分别为 68.7%±2.9%、
（rhAChE）溶液 50 μL，温度保持在 37 ℃，20 min 39.4%±3.1%、74.5%±3.1%、56.9%±4.1%、47.6%±
后，加入底物、显色剂及 pH 为 7.4 的磷酸缓冲液至 5.1%。2 位苯环上供电子取代基也使抑制率提高，
总体积为 1000 μL，底物与显色剂浓度分别为 10.0 如Ⅴk 和Ⅴl 的抑制率为 80.1%±3.1%和 66.2%±
和 12.5 μmol/L，20 ℃保温反应 20 min，在 410 nm 3.4%%高于Ⅴi、Ⅴj 和Ⅴm（46.7%±2.8%、49.5%±
波长下，测定吸光度 A，按式（1）计算抑制率（%）， 2.4%和 53.5%±4.4%）。这说明 2 位和 6 位苯环上引
多奈哌齐作为阳性对照药。 入供电子取代基有利于化合物活性的增高。而化合