Page 170 - 《精细化工》2021年第8期

·1664· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 38 卷

围内体系基本无荧光，说明探针本身并不受环境 pH
影响；加入 H 2 O 2 后，在 pH 小于 6 时体系基本无荧
光。这是因为酸性条件下阻断了分子内的 ICT 效
应，在 pH = 7.4~10 范围内则可产生较强且较稳定的
荧光，而在 pH 大于 10 时荧光逐渐减弱，这可能是
因为强碱条件破坏了部分探针分子的结构。综上所
述，TC-BOR 可用于生理环境下对活细胞的测试。
2.4 浓度梯度实验结果分析

为更好地了解 TC-BOR 的灵敏度，进行了 H 2 O 2

浓度梯度实验，结果见图 6。 图 7 TC-BOR 对不同离子（a）、小分子及活性物种（b）
的响应图
Fig. 7 Response diagrams of TC-BOR to different ions (a),
small molecules and active species (b)

图 7b 显示，在分析物终浓度相同的情况下，
TC-BOR 仅对 H 2 O 2 有响应。以上说明 TC-BOR 具
有良好的专一性，且可用于复杂生理环境的测试。
2.6 细胞实验结果分析
对 TC-BOR 的细胞毒性进行评估是可以开展活
体成像实验的前提，细胞存活率与 TC-BOR 浓度关
系见图 8。如图 8 所示，在探针浓度为 10 μmol/L（测

图 6 探针 TC-BOR 的浓度梯度曲线 试所需浓度）时，细胞存活率可保持在 90%左右，
Fig. 6 Concentration gradient curve of probe TC-BOR 与不加探针时的细胞存活率基本一致，说明探针具

如图 6 所示，通过拟合 H 2 O 2 浓度和荧光强度关 有较低的细胞毒性，不会影响细胞本身的生理活动。
系的线性曲线，表明在 H 2 O 2 浓度为 0~1.0 mmol/L 在此基础上，考察在探针浓度为 10 μmol/L 时细胞
范围内，探针的荧光强度与 H 2 O 2 浓度呈现良好的线 存活率与作用时间之间的关系，结果见图 9。

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性关系，线性拟合系数 R = 0.996。根据最低检测限
计算公式：LOD = 3σ/k〔LOD 为最低检测限；σ 为
空白多次测量（≥20 次）的标准偏差；k 为方法的
灵敏度，即校准曲线的斜率〕，计算得到探针的最低
检测限为 2.27 μmol/L。
2.5 选择性实验结果分析
选取一系列常见的离子、氨基酸以及活性物种
进行探针的选择性测试，结果见图 7。
由图 7a 可见，在分析物终浓度均为 1.0 mmol/L
时，探针仅在有 H 2 O 2 存在时表现出显著的荧光增
图 8 细胞存活率与 TC-BOR 浓度关系
强，而对其他离子基本无响应。随后，选取一系列 Fig. 8 Relationship between cell survival rate and TC-BOR
细胞中常见的氨基酸小分子及活性物种进行测试 concentration

（图 7b），因为这些氨基酸小分子在细胞内含量甚
微，因此将它们的终浓度设定为 50.0 μmol/L。

图 9 细胞存活率与作用时间的关系
Fig. 9 Relationship between cell survival rate and reaction time