Page 86 - 《精细化工》2021年第9期
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·1800·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 38 卷

            〔 Fmoc-Asp(OtBu)-OH 〕、丝氨酸〔 Fmoc-                   （MALDI-TOF- MS）测得所合成多肽的相对分子质
            Ser(tBu)-OH〕、1-羟基苯并三氮唑（HOBT）、苯并                    量为 1951.5，与 PEG-R 7 -RGDS 的理论相对分子质
            三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸盐（HBTU）、                     量一致，证明 PEG-R 7 -RGDS 的成功合成。
            2-氯-三苯甲基氯树脂，AR，上海吉尔生化公司；三                          1.2.2   实心 SiO 2 纳米颗粒的合成
            乙氧基硅基丁醛，质量分数为 90%，美国 Gelest 公                          取 428 mL 无水乙醇、60 mL 蒸馏水和 10 mL
            司；2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA），AR，                     （0.52 mol）氨水加入 1000 mL  圆底烧瓶中，加热
            碧云天生物科技有限公司；噻唑蓝（MTT），德国                            至 30  ℃。将 10 mL（0.045 mol）TEOS 以 1 滴/s 的
            Bio Froxx 公司；DMEM 培养基、青霉素-链霉素（青                    速率缓慢滴加至上述溶液中，剧烈搅拌 2 h。将得
            霉素：10000 units/mL，链霉素：10000 mg/L）、胎                到的白色悬浊液离心（12000 r/min，10 min），收
            牛血清（FBS），美国 Gibco 公司。                              集沉淀。分别先后用超纯水和无水甲醇洗涤沉淀 3
                 LS 55 型荧光分光光度计，英国 Perkin Elmer                次，25  ℃下真空干燥 24 h，合成得到实心 SiO 2 纳
            公司；Nexus470 傅里叶变换红外光谱仪，美国                          米颗粒。
            Nicolet 公司；Nano-ZS90 粒度电位仪，英国 Malvern              1.2.3   负载 MnO 2 的 HMSN(MnO 2@HMSN)的合成
            仪器有限公司；TecnaiG2F20S-TWIN 透射式电子显                        将 0.1 g SiO 2 纳米颗粒分散于 20 mL 蒸馏水中，
            微镜，美国 FEI 公司；MALDI-TOF 基质辅助激光                      超声处理 30 min 至分散均匀，得溶液 A。取 0.15 g
            解析飞行时间质谱仪，美国 Bruker Daltonic 公司；                   CTAB（0.412 mmol）溶解于 30 mL 去离子水中，随
                                                               后加入 30 mL 无水乙醇和 0.55 mL 氨水，得溶液 B。
            D8 ADVANCE X 射线衍射仪，德国 Bruker 公司；
                                                               将溶液 A 加入溶液 B 中，剧烈搅拌使其混合均匀，
            EscaLab Xi+X 射线光电子能谱仪，英国 Thermo
                                                               然后加入 0.25 mL TEOS，反应 6 h。反应结束后，
            Fisher 公司；TG 209 F3 热重分析仪，德国 Netzsch
                                                               离心（12000 r/min，10 min），收集沉淀。分别先后
            仪器制造有限公司；TG 209 F3BNA610 CO 2 培养箱，
                                                               用超纯水和无水甲醇洗涤沉淀 3 次，25  ℃下真空干
            日本大和科学株式会社；ELX808 酶标仪，美国 Bio
                                                               燥 24 h，所得产物为 SiO 2 @MSNs/CTAB。
            Teck 公司；超分辨显微镜，德国 Leica 公司。
                                                                   将上述得到的 SiO 2 @MSNs/CTAB 产物超声分
            1.2   合成
                                                               散于 20 mL 去离子水中，加入 470 mg（4.43 mmol）
            1.2.1  PEG-R 7 -RGDS 的合成                           Na 2 CO 3 ，升温至 50  ℃，剧烈搅拌反应 10 h。反应
                 采用 Fmoc 固相多肽合成法合成目标肽               [15] ，具
                                                               结束后，离心（12000 r/min，10 min），收集沉淀。
            体 步骤如下 ：将 1 g 2- 氯 - 三苯 甲基 氯 树 脂
                                                               分别先后用超纯水和无水甲醇洗涤沉淀 3 次，得到
            （3.19 mmol）加入固相合成柱中，随后加入 20 mL
                                                               SiO 2 内核被刻蚀的 HMSN/CTAB。
            DMF 溶胀 1 h。用 DMF 洗涤 3 次。随后向合成柱中
                                                                   将 100 mg HMSN/CTAB 超声分散于 20 mL
            加入 1115.69 mg（1.94 mmol）Fmoc-Ser(tBu)-OH 和
                                                               KMnO 4   溶液（0.1 mol/L）中，在 40  ℃下避光剧烈
            2 mL（12.1 mmol）DIEA 的 20 mL DMF 溶液，搅拌
                                                               搅拌 12 h。反应结束后，离心（12000 r/min，10 min），
            2 h。向固相合成柱中加入 20 mL 哌啶/DMF〔V(哌
                                                               收集沉淀。分别先后用超纯水和无水甲醇洗涤 3 次，
            啶)∶V(DMF)=1∶4〕的脱落剂，搅拌 15 min 后，除                   室温下真空 25  ℃干燥备用。将干燥后的产物均匀
            去溶剂。然后用 DMF 洗涤树脂 3 次，以脱除                           分散至甲醇 / 盐酸混 合 液中，其中 甲醇 50 mL
            Fmoc-Ser(tBu)-OH 中的 9-芴基甲氧基羰基保护基                   （1.24 mol），浓盐酸（质量分数 36%~38%  ）3 mL，
            （Fmoc）。向合成柱中加入 798.23 mg（1.94 mmol）                在 80  ℃下剧烈搅拌，回流 48 h。反应结束后，离
            Fmoc-Asp(OtBu)-OH，882.78 mg（2.33 mmol）HBTU，        心（12000 r/min，10 min），收集沉淀并分别先后用
            314.51 mg（2.33 mmol）HOBT，2 mL（12.1 mmol）           超纯水和无水甲醇洗涤 3 次，室温下真空 25  ℃干燥，
            DIEA 和 20 mL DMF 溶液，搅拌 2 h 后取少量树脂，                 得到的产物为 MnO 2@HMSN。
            加至含有茚三酮（0.01 g/L）的甲醇溶液验色。重复                        1.2.4   合成 MnO 2 @HMSN-CHO
            上述实验步骤，直至合成 RGDS 和 PEG-R 7 -RGDS。                      将 100 mg MnO 2 @HMSN 超声分散于 40 mL 无
            分别先后用 DMF、甲醇和二氯甲烷洗涤树脂，并放                           水甲苯中，随后加入 150 μL 三乙氧基硅基丁醛，在
            入真空干燥箱 25  ℃下干燥 24 h。最后将 20 mL 的                   100  ℃，N 2 保护下回流 24 h。反应结束后，离心
            多肽切落剂 TFA/H 2 O/TIS 〔 V(TFA) ∶ V(H 2 O) ∶          （12000 r/min，10 min），收集沉淀。分别先后用超
            V(TIS)=95∶2.5∶2.5〕加至接有多肽的树脂中，室                     纯水和无水甲醇洗涤沉淀 3 次，产物置于 60  ℃下
            温下搅拌 2 h。收集混合溶液，旋蒸浓缩至黏稠液体，                         真空干燥，所得产物为 MnO 2 @HMSN-CHO。
            然后逐滴加至冰乙醚中沉淀。离心除去上清液，常                             1.2.5   合成 DOX/MnO 2 @HMSN-imide-PEG-R 7 -RGDS
            温下真空干燥 12 h 得到最终产物。利用质谱仪                               将 60 mg  MnO 2 @HMSN-CHO 超声分 散于
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