Page 128 - 《精细化工》2022年第10期

·2062· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 39 卷

后续测试样品的蒸馏水提取物以蒸馏水为溶 1.2.4 体外降血脂能力测定
剂，其余各提取物以无水乙醇为溶剂，将样品配制 1.2.4.1 胆酸盐标准曲线的绘制
到需要的质量浓度，现用现配。 参照文献[14]方法测定，略作修改。分别取 2 mL
1.2.2 活性物质含量的测定 不同质量浓度的两种胆酸盐溶液于具塞试管中，加
[9]
以没食子酸为标准品，采用福林酚法 测定总 入 6 mL 质量分数 60%的硫酸，70 ℃水浴 20 min，
多酚含量，得到没食子酸质量浓度 x（g/L）与吸光 冷却至室温，在波长 387 nm 处测定其吸光度，得到
度 y 的标准曲线方程为 y=1.3065x–0.0148（相关系数 胆酸盐浓度 x（mmol/L）与吸光度 y 的标准曲线方
2
2
R =0.9993）。以芦丁为标准品，采用 UV 法测定总 程为：牛磺胆酸钠，y=1.5042x+0.087（R =0.9996）；
2
黄酮含量 [10] ，得到芦丁质量浓度 x（g/L）与吸光度 甘氨胆酸钠，y=1.9141x+0.1021（R =0.9993）。
2
y 的标准曲线方程为 y=3.0829x+0.0008（R =0.9995）。 1.2.4.2 胆酸盐结合率的测定
以儿茶素为标准品，采用盐酸-香草醛法 [11] 测定原花 参照文献[15]方法，略作修改。在 100 mL 具塞
青素含量，得到儿茶素质量浓度 x（g/L）与吸光度 三角瓶中加入 3 mL 质量浓度为 5 g/L 的样品，再加
2
y 的标准曲线方程为 y=1.9236x–0.0243（R =0.9992）。 入 3 mL 10 g/L 胃蛋白酶（酶溶液和胆酸盐溶液均以
总多酚、总黄酮和原花青素含量以每克沙棘渣不同 pH 6.3 的 0.1 mol/L PBS 配制）和 1 mL 0.01 mol/L
极性溶剂提取物中含有标准品的质量（mg/g）表示。 的盐酸，模拟胃环境，在 37 ℃恒温振荡消化 1 h；
1.2.3 体外降血糖能力的测定 用 0.1 mol/L NaOH 溶液调节 pH 至 6.3，随后加入
1.2.3.1 α-葡萄糖苷酶活性抑制能力的测定 4 mL 质量浓度为 10 g/L 胰蛋白酶，模拟肠道环境，在
采用 ZHANG 等 [12] 描述的方法略作修改。先在 37 ℃恒温振荡消化 1 h。最后分别加入 4 mL
96 孔板内加入 250 μL 0.05 mol/L 磷酸盐缓冲液 1 mmol/L 甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠溶液，在 37 ℃
（PBS，pH 6.8）和 50 μL 0.01776 mol/L PNPG（PNPG 恒温振荡 1 h 后，将反应溶液在 4000 r/min 离心
和酶溶液均以 pH 6.8 的 0.05 mol/L PBS 配制），再
15 min，对上清液中的胆酸盐含量进行分析，并按
加入 50 μL 不同梯度质量浓度的样品和 50 μL 0.10
式（4）计算胆酸盐结合率：
U/mL α-葡萄糖苷酶溶液，37 ℃水浴 20 min 后，加 C  C
入 100 μL 1.0 mol/L Na 2 CO 3 水溶液终止反应，在 胆酸盐结合率/%= 1 2 ×100 （4）
C
1
405 nm 波长下测定混合物的吸光度。α-葡萄糖苷酶 式中：C 1 为反应溶液中初始胆酸盐的浓度，mmol/L；
抑制率按式（2）进行计算：
C 2 为反应溶液中剩余胆酸盐的浓度，mmol/L。
 A  A 
抑制率/%= 1 2 4  ×100 （2） 1.2.5 UPLC-Q-Orbitrap HRMS 测定

 A  A 3  称取一定量干燥的沙棘渣提取物，用甲醇配制
1
式中：A 2 为混合物的吸光度；A 4 为使用 PBS 代替酶
成质量浓度为 0.1 g/L 的溶液，过 0.22 µm 微孔滤膜
溶液的混合物吸光度；A 1 为使用 PBS 代替样品的混
后用于 HPLC-MS/MS 测定，在森林植物生态学教育
合物吸光度；A 3 为使用 PBS 代替样品和酶溶液的混
部重点实验室——液质平台进行检测。液相色谱条
合物吸光度。
件：Hyperil Gold 柱（100 mm×2.1 mm×1.9 µm）；
1.2.3.2 α-淀粉酶活性抑制能力的测定 流动相 A 为体积分数 0.1%的甲酸水溶液，流动相 B
根据 PODSEDEK 等 [13] 描述的方法稍加修改。将
为甲醇，梯度洗脱程序的时间和流动相 B 体积分数
20 μL 质量分数为 0.2%可溶性淀粉水溶液、20 μL 不
如下：0~1 min，2% B；1~12 min，2%~98% B；12~
同梯度质量浓度的样品或 0.1 mol/L PBS（pH 6.9）与
15 min，98%~2% B；流速 0.35 mL/min，柱温 40 ℃，
20 μL 1.0 U/mL α-淀粉酶混合溶于 96 孔板开始酶反应。
自动进样 1 μL。
在 37 ℃下水浴 10 min 后，加入 80 μL 0.4 mol/L 盐酸
质谱条件：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式为
水溶液终止反应。最后加入 100 μL 5 mmol/L I 2 -KI
正负离子同时扫描；喷雾电压 3800/3000 V(+/–)；鞘
溶液，并在 600 nm 波长下测定混合物的吸光度。α-
气流速 40 psi；辅助气流速 10 psi；毛细管温度 320
淀粉酶抑制率按式（3）计算：
℃，探头加温器温度 350 ℃；S-Lens 分辨率为 60。
 A  A 
抑制率/%= 1 2 4  ×100 （3） 扫描模式为全扫描，一级分辨率 70000，二级分辨

 A  A 3  率 17500，m/Z 扫描范围：70~1000。
1
式中： A 为混合物的吸光度； A 为使用 PBS 代替 1.3 数据分析
2
4
酶溶液的混合物吸光度；A 为使用 PBS 代替样品的 每组实验重复 3 次，结果以 x ±s（平均值±标准
1
混合物吸光度；A 为使用 PBS 代替样品和酶溶液的 偏差）表示，采用 Origin 2018 软件绘图，采用 SPSS
3
混合物吸光度。 26.0 对数据进行统计学分析。