Page 164 - 《精细化工》2022年第11期

·2314· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 39 卷

四因素三水平响应面法对藜麦蛋白泡沫分离工艺进 处测量溶液的吸光度。乳化能力（EC）由式（5）
行优化。在单因素实验基础上，选取 pH 为 4.0、温 计算：
度为 35 ℃、载液量为 250 mL、料液比为 0.3 g/L 为 EC/ %  A 500  100 （5）
0 水平，每个因素的实验水平分别用–1、0、1 进行 将均质化乳液静置 30 min，用相同方法测定其
编码（表 1），共设计 29 个实验组，其中 24 个因子 吸光度，标记为 EC 30 。乳液稳定性（ES）由式（6）
点为每个因素形成的三维顶点上的单因素值，5 个 计算：
零点为区域中心点。响应值为藜麦蛋白的富集度和 ES/ %  ( EC / EC ) 100 （6）
30
回收率 [16] 。 1.5.4 发泡能力和泡沫稳定性测定
分别配制质量浓度为 5.0、10.0、15.0、20.0、
表 1 响应面设计中使用的因素和水平 25.0、30.0 g/L 的藜麦蛋白溶液，每份取 20 mL，然
Table 1 Factors and levels of response surface design
后以 10000 r/min 均质 2 min。记录均质化结束时的
水平
因素 泡沫体积，发泡能力（FC）由式（7）计算：
–1 0 1
/ ) 100
FC / %  (VV （7）
1
A 温度/℃ 30 35 40
其中：V 1 是均质化结束时的泡沫体积，mL；V 是均
B pH 3.5 4.0 4.5
化前的溶液体积，mL。
C 载液量/mL 200 250 300
室温下均质化乳液静置 30 min 后记录泡沫体
D 料液比/(g/L) 0.2 0.3 0.4
积，泡沫稳定性（FS）由式（8）计算：
/
1.5 藜麦蛋白功能特性的测定 FS/ %  (VV 1 ) 100 （8）
2
1.5.1 持水能力测定 其中：V 2 是静置 30 min 后的泡沫体积，mL。
精确称量 6 份 0.1 g 藜麦蛋白粉样品倒入离心管 1.6 相对分子质量分布测定
中，再加入 10 mL 蒸馏水，分别在 20、30、40、50、 使用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳
60、70 ℃下水浴加热 1 h，然后以 3000 r/min 离心 （SDS-PAGE）来测定藜麦蛋白的相对分子质量（简
15 min，弃去上清液并称量下层沉淀质量。持水量 称分子量）分布 [23] 。用质量分数为 12%丙烯酰胺配
由式（3）计算： 成质量分数为 4%的丙烯酰胺堆积凝胶，进样量 5 μL，
m  m 调节电压至 60 V 开始电泳。当样品进入丙烯酰胺堆
持水量 /(g / g)  2 1 （3）
m 积凝胶时，电压调为 100 V，电泳产生的蛋白条带
其中：m 是藜麦蛋白粉样品质量，g；m 1 是离心管 用考马斯亮蓝 G250 染色。
和样品的总质量，g；m 2 是离心管和沉淀物的总质 1.7 抗氧化性测定
量，g。 以 DPPH 自由基清除率来评价藜麦蛋白的抗氧
1.5.2 持油能力测定 化性。分别取 1 mL 质量浓度为 0.5、1.0、1.5、2.0、
准确称量 6 份 0.1 g 藜麦蛋白粉样品加入离心管 2.5 g/L 的藜麦蛋白（或 V C ）溶液﹐加 3 mL DPPH
中，再加入 10 mL 豆油，分别在 20、30、40、50、 （0.2 mmol/L）水溶液﹐充分摇匀反应 90 s，在
60、70 ℃的水浴中加热 1 h，然后以 3000 r/min 离 517 nm 处测量混合液的吸光度，并由式（9）计算
抗氧化物质对 DPPH 自由基的清除率 [24] 。
心 15 min，去掉上清液，称量下层沉淀物质量。持
DPPH清除率 / % [1  (A  A ) / ] 100A  （9）
油量由式（4）计算： X 0
m m  其中：A X 是提取液与 DPPH 混合液的吸光度；A 0 是
持油量 /(g / g)  2 1 （4）
m 空白溶液（提取液与水的混合溶液，不含 DPPH）
其中： m 是藜麦蛋白粉样品的质量，g； m 是离心 的吸光度；A 是 DPPH 溶液的吸光度。
1
管和样品的总质量，g； m 是离心管和沉淀物的总 1.8 数据处理
2
质量，g。 本文所有实验平行进行 3 次，取平均值进行分
析，使用 Origin 8.5 进行映射和数据分析，并使用
1.5.3 乳化能力和乳液稳定性测定
Design-Expert V8.0.6.1 对工艺参数进行优化。
分别配制质量浓度为 5.0、10.0、15.0、20.0、
25.0、30.0 g/L 的藜麦蛋白水溶液，每份取 2 mL，
2 结果与讨论
加入 20 mL 大豆油，然后以 10000 r/min 均质 2 min。
精确吸取底部乳液 0.1 mL，立即加入 25 mL 质量分 2.1 藜麦蛋白泡沫分离工艺单因素实验
数为 0.1%的十二烷基硫酸钠（SDS）溶液。使用质 2.1.1 酸碱度对回收率和富集度的影响
量分数为 0.1%的 SDS 溶液作为对照，并在 500 nm 溶液的酸碱度是影响泡沫分离效果的重要因素