Page 149 - 《精细化工》2022年第3期
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第 3 期                     黄文睿,等:  绿色低共熔溶剂提取野菊花中黄酮类化合物                                    ·571·


            45 kHz)30 min,提取条件为:含水量 30%、提取                     量浓度为横坐标(X′),峰面积为纵坐标(Y′),绘制
            时间 45 min、固液比 1∶50(g∶mL)、提取温度                      标准曲线,其线性回归方程为:Y′=2963.9X′+14.08,
                                                                2
            60 ℃,之后以 10000 r/min 离心 8 min,回收上清液                R =0.9996。样品中总槲皮素含量的测定与标准曲线
            并用 0.22 μm 聚醚砜(PES)微孔滤膜过滤,所得供                      的测定方法相同,总槲皮素得率计算公式如下:
                                                                                         V
            试液用于总黄酮和槲皮苷化学成分分析。另取                                                       V   
                                                                               B      2                (2)
                                                                                      
            0.9 mL 上述供试液,加入 0.1 mL 4 mol/L 的盐酸,                                     mV   1
            于 80  ℃恒温水浴水解 1 h,冷却后加入体积分数                        式中:B 为总槲皮素得率,mg/g;  为标准曲线中
            70%甲醇溶液定容至 1 mL,所得溶液用于总槲皮素                         总槲皮素的质量浓度,mg/L;V  为取样体积,mL;
                                                                                           1
            化学成分分析。                                            V  为稀释体积,mL;V  为提取液总体积,mL;m
            1.5   对照溶液的制备                                       2
                                                               为样品质量,g。
                 称取野菊花粉末 0.5 g 于具塞锥形瓶中,加入
                                                               1.6.3   槲皮苷得率的测定
            25 mL  体积分数 70%甲醇溶液,后续操作与供试液
                                                                   参照文献[20]方法,不同之处为:色谱柱 Athena
            制备方法相同。
                                                               C 18 -WP(4.6 mm×250 mm,  5  μm);检测波长 348
            1.6    总黄酮、总槲皮素和槲皮苷得率的测定                           nm;流速 1 mL/min;柱温 25  ℃;进样量 25 μL;
            1.6.1   总黄酮得率的测定                                   流动相 A 为乙腈,流动相 B 为体积分数 0.1%磷酸
                 利用亚硝酸钠-硝酸铝比色法             [18] 测定提取后野
                                                               水溶液;梯度洗脱:0~11 min,A 10%~18%,B
            菊花总黄酮的质量浓度。用体积分数 70%甲醇溶液
                                                               90%~82%;11~30 min,A 18%~20%,B 82%~80%;
            配制质量浓度为 1 g/L 的芦丁标准溶液。将芦丁标
                                                               30~40 min,A 20%,B 80%。
            准溶液梯度稀释为 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g/L,分
                                                                   用体积分数 70%甲醇溶液配制质量浓度为
            别取不同质量浓度的芦丁标准溶液 0.1 mL 置于
                                                               0.1 g/L 的槲皮苷标准溶液。将槲皮苷标准溶液质量
            10 mL 容量瓶中,加入 0.3 mL  质量分数为 5%的
                                                               浓度梯度稀释为 0、0.0175、0.035、0.0525、0.07 g/L,
            NaNO 2 溶液,振荡均匀后放置 6 min;再加入 0.3 mL
                                                               采用高效液相色谱测定上述不同质量浓度的槲皮苷
            质量分数为 10%的 Al(NO 3 ) 3 溶液,混匀后放置
                                                               溶液。以槲皮苷质量浓度为横坐标(X"),峰面积为
            6 min;加入 4 mL 质量分数为 4%的 NaOH 溶液,最
                                                               纵坐标(Y")绘制标准曲线。其线性回归方程为:
            后加入体积分数 70%甲醇定容至刻度,振荡均匀后
                                                                                    2
                                                               Y"=25.087X"–13.396,R =0.9995。样品中槲皮苷含
            放置 15 min。通过紫外-可见分光光度计测定反应后
                                                               量的测定与标准曲线的测定方法相同,槲皮苷得率
            不同质量浓度芦丁标准溶液在 510 nm 处的吸光度
                                                               计算公式如下:
            值。以标准品质量浓度为横坐标(X)、吸光度为纵
                                                                           C    V   V     /(m      V   )      (3)
                                                                                   2
                                                                                              1
            坐标(Y)绘制标准曲线。其线性回归方程为:                              式中:C 为槲皮苷得率,mg/g;  为标准曲线中槲
                                2
            Y=0.1585X+0.0017,R =0.9996。样品中总黄酮含量
                                                                                      ''
                                                               皮苷的质量浓度,g/L;V 为取样体积,mL;V  为
            的测定方法为:取 0.1 mL 待测样品于 10 mL 容量瓶                                          1                   2
                                                               稀释体积,mL;V  为提取液总体积,mL;m 为样
            中,后续操作与标准曲线测定方法相同,总黄酮得
                                                               品质量,g。
            率计算公式如下:
                          A     V   2  V  /(m V  1 )    (1)   1.7  DES 提取黄酮类化合物条件优化
            式中:A 为总黄酮得率,mg/g;  为标准曲线中总                            为了提高提取得率,对影响提取效果的因素进
                                                               行优化,如 DES 种类、DES 含水量、提取时间、固
            黄酮的质量浓度,g/L;V 为取样体积,mL;V 为
                                   1
                                                       2
            稀释体积,mL;V 为提取液总体积,mL; m 为样                         液比、提取温度,每个实验均在只改变一个变量且
                                                               其他因素不变的情况下进行。
            品质量,g。
            1.6.2   总槲皮素得率的测定                                  2   结果与讨论
                 参照文献[19]方法,不同之处为色谱条件:流
            动相为 V(甲醇)∶V(水)=60∶40,磷酸调流动相 pH                     2.1   DES 的 FTIR 分析
            至 3.0;流速 1 mL/min;紫外检测波长 253 nm;进                      图 1 为合成的 DES 及其单体的 FTIR 谱图。
                                                                                              –1
            样量 10 μL。                                              图 1a 中,乙二醇在 3293 cm 处的吸收峰由
                                                                                                      –1
                 用体积分数 70%甲醇溶液配制质量浓度为                          O—H 振动引起,在 DES-1 中该峰向 3287 cm 移动,
            2 mg/L 的槲皮素标准溶液。将槲皮素标准品质量浓                         说明 ChCl 和乙二醇之间形成了 O—H···O、O—
            度稀释为 0、0.4、0.8、1.2、1.6 mg/L。以槲皮素质                  H···Cl 等氢键结构。
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