Page 149 - 《精细化工》2022年第3期
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第 3 期 黄文睿,等: 绿色低共熔溶剂提取野菊花中黄酮类化合物 ·571·
45 kHz)30 min,提取条件为:含水量 30%、提取 量浓度为横坐标(X′),峰面积为纵坐标(Y′),绘制
时间 45 min、固液比 1∶50(g∶mL)、提取温度 标准曲线,其线性回归方程为:Y′=2963.9X′+14.08,
2
60 ℃,之后以 10000 r/min 离心 8 min,回收上清液 R =0.9996。样品中总槲皮素含量的测定与标准曲线
并用 0.22 μm 聚醚砜(PES)微孔滤膜过滤,所得供 的测定方法相同,总槲皮素得率计算公式如下:
V
试液用于总黄酮和槲皮苷化学成分分析。另取 V
B 2 (2)
0.9 mL 上述供试液,加入 0.1 mL 4 mol/L 的盐酸, mV 1
于 80 ℃恒温水浴水解 1 h,冷却后加入体积分数 式中:B 为总槲皮素得率,mg/g; 为标准曲线中
70%甲醇溶液定容至 1 mL,所得溶液用于总槲皮素 总槲皮素的质量浓度,mg/L;V 为取样体积,mL;
1
化学成分分析。 V 为稀释体积,mL;V 为提取液总体积,mL;m
1.5 对照溶液的制备 2
为样品质量,g。
称取野菊花粉末 0.5 g 于具塞锥形瓶中,加入
1.6.3 槲皮苷得率的测定
25 mL 体积分数 70%甲醇溶液,后续操作与供试液
参照文献[20]方法,不同之处为:色谱柱 Athena
制备方法相同。
C 18 -WP(4.6 mm×250 mm, 5 μm);检测波长 348
1.6 总黄酮、总槲皮素和槲皮苷得率的测定 nm;流速 1 mL/min;柱温 25 ℃;进样量 25 μL;
1.6.1 总黄酮得率的测定 流动相 A 为乙腈,流动相 B 为体积分数 0.1%磷酸
利用亚硝酸钠-硝酸铝比色法 [18] 测定提取后野
水溶液;梯度洗脱:0~11 min,A 10%~18%,B
菊花总黄酮的质量浓度。用体积分数 70%甲醇溶液
90%~82%;11~30 min,A 18%~20%,B 82%~80%;
配制质量浓度为 1 g/L 的芦丁标准溶液。将芦丁标
30~40 min,A 20%,B 80%。
准溶液梯度稀释为 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g/L,分
用体积分数 70%甲醇溶液配制质量浓度为
别取不同质量浓度的芦丁标准溶液 0.1 mL 置于
0.1 g/L 的槲皮苷标准溶液。将槲皮苷标准溶液质量
10 mL 容量瓶中,加入 0.3 mL 质量分数为 5%的
浓度梯度稀释为 0、0.0175、0.035、0.0525、0.07 g/L,
NaNO 2 溶液,振荡均匀后放置 6 min;再加入 0.3 mL
采用高效液相色谱测定上述不同质量浓度的槲皮苷
质量分数为 10%的 Al(NO 3 ) 3 溶液,混匀后放置
溶液。以槲皮苷质量浓度为横坐标(X"),峰面积为
6 min;加入 4 mL 质量分数为 4%的 NaOH 溶液,最
纵坐标(Y")绘制标准曲线。其线性回归方程为:
后加入体积分数 70%甲醇定容至刻度,振荡均匀后
2
Y"=25.087X"–13.396,R =0.9995。样品中槲皮苷含
放置 15 min。通过紫外-可见分光光度计测定反应后
量的测定与标准曲线的测定方法相同,槲皮苷得率
不同质量浓度芦丁标准溶液在 510 nm 处的吸光度
计算公式如下:
值。以标准品质量浓度为横坐标(X)、吸光度为纵
C V V /(m V ) (3)
2
1
坐标(Y)绘制标准曲线。其线性回归方程为: 式中:C 为槲皮苷得率,mg/g; 为标准曲线中槲
2
Y=0.1585X+0.0017,R =0.9996。样品中总黄酮含量
''
皮苷的质量浓度,g/L;V 为取样体积,mL;V 为
的测定方法为:取 0.1 mL 待测样品于 10 mL 容量瓶 1 2
稀释体积,mL;V 为提取液总体积,mL;m 为样
中,后续操作与标准曲线测定方法相同,总黄酮得
品质量,g。
率计算公式如下:
A V 2 V /(m V 1 ) (1) 1.7 DES 提取黄酮类化合物条件优化
式中:A 为总黄酮得率,mg/g; 为标准曲线中总 为了提高提取得率,对影响提取效果的因素进
行优化,如 DES 种类、DES 含水量、提取时间、固
黄酮的质量浓度,g/L;V 为取样体积,mL;V 为
1
2
稀释体积,mL;V 为提取液总体积,mL; m 为样 液比、提取温度,每个实验均在只改变一个变量且
其他因素不变的情况下进行。
品质量,g。
1.6.2 总槲皮素得率的测定 2 结果与讨论
参照文献[19]方法,不同之处为色谱条件:流
动相为 V(甲醇)∶V(水)=60∶40,磷酸调流动相 pH 2.1 DES 的 FTIR 分析
至 3.0;流速 1 mL/min;紫外检测波长 253 nm;进 图 1 为合成的 DES 及其单体的 FTIR 谱图。
–1
样量 10 μL。 图 1a 中,乙二醇在 3293 cm 处的吸收峰由
–1
用体积分数 70%甲醇溶液配制质量浓度为 O—H 振动引起,在 DES-1 中该峰向 3287 cm 移动,
2 mg/L 的槲皮素标准溶液。将槲皮素标准品质量浓 说明 ChCl 和乙二醇之间形成了 O—H···O、O—
度稀释为 0、0.4、0.8、1.2、1.6 mg/L。以槲皮素质 H···Cl 等氢键结构。