Page 144 - 《精细化工》2022年第3期

·566· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 39 卷

的速率，不是以共价键的形式与酶结合，减少游离 5 所示。
酶的数量或使酶失去活性。
由图 4 可知，Lineweaver-Burk 双倒数曲线为一
组相交于纵坐标正半轴的直线，随着丹参挥发油溶
液质量浓度的增大，米氏方程的直线斜率 K m /V m 也
随之增大，直线与纵坐标的交点 1/V m 保持不变，最
大反应速度 V m 为一个定值，计算结果如表 1 所示。
K m /V m 逐渐增大，V m 保持不变，因此，米氏常数 K m
逐渐增大。由文献[27]可知，丹参挥发油对酪氨酸
酶的抑制类型符合竞争性抑制，说明丹参挥发油是
通过与 L-DOPA 竞争酪氨酸酶的活性中心位点来抑
制酪氨酸酶的活性，推测丹参挥发油中的某些成分 图 5 复配物对酪氨酸酶的抑制能力
Fig. 5 Inhibitory effect on tyrosinase by the complexes
与底物的结构相似，可以与酶的活性位点直接结合，

通过减少与底物反应的酪氨酸酶的有效量，抑制酪 由图 5 所示，在质量浓度为 60 mg/L 时，4 种
氨酸酶催化氧化的反应速率。利用直线的斜率，以 复配物对酪氨酸酶抑制率均略低于丹参挥发油单独
丹参挥发油溶液的质量浓度为横坐标，直线的斜率 作用，略高于蒲公英提取物单独作用，复配物并没
为纵坐标拟合线性方程，线性方程的斜率即抑制常 有很大地提升或降低酪氨酸酶抑制率。结果表明，
数（K I ），为 0.0049 mg/L。 两种物质对酪氨酸酶的抑制作用无明显相互影响。
分析可能的原因是，蒲公英提取物对酪氨酸酶的抑
制类型为非竞争与反竞争的混合型抑制 [15] ，抑制剂作
用于酪氨酸酶的非活性位点和酶与底物的结合物。
丹参挥发油对酪氨酸酶的抑制类型为竞争性抑制，
抑制剂作用于酶的活性位点。两种提取物对酶活的
作用位点各不相同，因此复配后没有表现出拮抗作
用，两者之间对酪氨酸酶抑制无相互不利影响。结
合抗氧化和酪氨酸酶活性的抑制两个方面，蒲公英
提取物与丹参挥发油复配可协同增强抗氧化作用，但
其对酪氨酸酶活性的抑制影响不大，推测两种物质涉

图 4 不同质量浓度丹参挥发油溶液对酪氨酸酶抑制的 及的抗氧化反应与酪氨酸酶参与黑色素合成的反应
Lineweaver-Burk 双倒数曲线 过程的相关性不大。
Fig. 4 Lineweaver-Burk double reciprocal curves of 2.5 样品对受试菌的抑制能力
inhibition of tyrosinase by different mass
concentrations of Salvia miltiorrhiza volatile oil 根据抗氧化活性和酪氨酸酶活性的抑制作用结
果，选用蒲公英提取物和丹参挥发油质量比为 1∶1
表 1 丹参挥发油对酪氨酸酶的抑制动力学参数 的复配物进行抑菌实验，抑菌结果如图 6 所示。
Table 1 Inhibitory kinetic parameters on tyrosinase by Salvia
miltiorrhiza volatile oil
ρ/ K m/V m/[mg·min/ V m/ K m/
(mg/L) (L·ΔOD)] (ΔOD/min) (mg/L)
0 0.4524 0.0392 0.0177
100 0.8091 0.0317
140 0.9913 0.0388
160 1.2057 0.0473
200 1.4450 0.0566

2.4 复配物对酪氨酸酶活性的抑制作用
将抗氧化能力较强且酪氨酸酶抑制类型不同的

丹参挥发油和蒲公英提取物进行复配，研究其对酪
图 6 复配物的抑菌能力
氨酸酶抑制是否会起到协同增效的作用，结果如图 Fig. 6 Antibacterial activity by the complexes