Page 104 - 《精细化工》2022年第5期

·958· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 39 卷

1.2.4 体外释放对比实验 体分散体的降血糖肽的稳定性用作比较研究。
分别称取 200 mg 降血糖肽和降血糖肽固体分 1.2.7.2 储存温度对降血糖肽固体分散体稳定性的
散体（相当于降血糖肽 200 mg），置于溶出试验箱 影响
中，转速为 75 r/min，温度为 37 ℃，先在 0.1 mol/L 将 200 mg 降血糖肽固体分散体置于 10 mL 称
盐酸溶液反应 2 h，再以 0.2 mol/L 磷酸钠溶液调节 量瓶中，分别开口置于 60、40、25 ℃下放置 10 d，
溶液 pH 至 6.8，继续实验，每隔一定时间后取出溶 于第 0 d、第 5 d 和第 10 d 取样，采用 1.2.1 节方法
液 2 mL 并及时补充等量释放介质。所取样液经 测定吸光度并计算降血糖肽质量浓度，同时通过公
0.45 µm 微孔滤膜过滤，采用 1.2.1 节方法测定吸光 式（2）计算累积释放率。
度并计算降血糖肽质量浓度，同时按式（2）计算累 1.3 数据处理与分析
积释放率。 所有数据均采用 Origin 2018 进行数据分析与
n 1 作图。
 n V  V i  i
0
/%  累积释放率 i 1  100 （2） 2 结果与讨论
m
式中：ρ n 为第 n 次取样后释放介质中降血糖肽的质 2.1 降血糖肽固体分散体制备工艺优化
量浓度，g/L；V 0 为释放介质的体积，L；V i 为每次 调节配方中不同物质的比例，可以获得具有较
取样的体积，L；ρ i 为第 i 次补液后取样前释放介质 高累积释放率的工艺参数，结果见表 1。其提高累
中降血糖肽的质量浓度，g/L；m 为降血糖肽投料 积释放率的原理是 EL-100 的活性基团为—COOH，
量，g。 在较低的 pH 下较为稳定，而在较高的 pH 环境中与
1.2.5 降血糖肽固体分散体的表征 OH 结合成盐，由于 COO 的相互排斥作用，使分子
–
–
SEM 测试：分别取适量的降血糖肽、EL-100、 间空隙变大，结构疏松，功能原料得以释放 [11] 。
HPMC、降血糖肽固体分散体和物理混合物，喷金
处理后通过 SEM 观察表观形貌。FTIR 测试：采用 表 1 不同配方条件下降血糖肽固体分散体的累积释放率
Table 1 Cumulative release rate of hypoglycemic peptide
溴化钾压片法对降血糖肽、EL-100、HPMC、降血 of different formulations
糖肽固体分散体和物理混合物进行 FTIR 测试，波 配方中固形物质量/mg
①
–1
数范围 4000~ 400 cm 。TEM 测试：取适量降血糖 编号 EL-100 降血糖肽 HPMC 累积释放率 /%
肽、降血糖肽固体分散体和物理混合物用纯水溶解， 1 200 100 20 93.54
磷钨酸法染色后，用 TEM 进行观察。 2 400 100 20 73.77
1.2.6 DPP-Ⅳ抑制率的测定 3 600 100 20 70.97
4 200 200 20 86.45
采用荧光光谱法测定 DPP-Ⅳ抑制率。依次将
5 400 200 20 89.04
50 μL DPP-Ⅳ酶（49 μL 缓冲液和 1 μL 酶）、磷酸盐 6 600 200 20 87.97
缓冲液（pH=6.8）配制的 10 μL 抑制剂（样品）加 7 200 300 20 84.04
入酶标板混匀，加入 25 μL 底物启动反应。37 ℃下 8 400 300 20 88.06
孵育 15 min，在酶标仪上检测得到样品的荧光度值。 9 600 300 20 88.75
按式（3）计算得出对 DPP-Ⅳ的抑制率。 ① 2 h 时的累积释放率。

F  F  F
抑制率 /%  对照 样品 空白  100 （3） 如表 1 所示，固定释放调节剂 HPMC 用量，当
F 对照 载体 EL-100 与降血糖肽的质量比接近 2∶1 时，降
式中：F 样品为样品的荧光度值；F 空白为 50 μL 缓冲液 血糖肽固体分散体中降血糖肽的累积释放率较大；
代替 50 μL DPP-Ⅳ酶测得的荧光度值；F 对照为 10 μL 当两者质量比大于 2∶1 时，累积释放率降低。可能
缓冲液代替 10 μL 抑制剂（样品）测得的荧光度值。 最开始随着 EL-100 用量的逐渐增加，载体能完全包
1.2.7 降血糖肽固体分散体的稳定性测定 埋降血糖肽，释放效果较好，但是随着载体用量的
1.2.7.1 储存时间对降血糖肽固体分散体稳定性的 进一步增大，降血糖肽被过度包埋，形成的膜分子流
影响 动能力太差，导致累积释放率下降。降血糖肽固体
将 200 mg 降糖血肽固体分散体置于 10 mL 称 分散体的制备配方为 200 mg EL-100、100 mg 降血
量瓶中，置于温度 20℃，湿度 60%条件下开口放置 糖肽和 20 mg HPMC〔即 m(降血糖肽)∶m(EL-100)∶
10 d，分别于第 0 d、第 5 d 和第 10 d 取样，采用 1.2.1 m(HPMC)=1∶2∶0.2〕时，降血糖肽固体分散体的
节方法测定吸光度并计算降血糖肽质量浓度，同时 累积释放率达到最高，为 93.54%。因此，采用该配
通过公式（2）计算累积释放率。同时，将未制成固 方制备的固体分散体进行后续实验；并且按此配方