Page 103 - 《精细化工》2022年第5期

第 5 期 陈百科，等: 溶剂法制备降血糖肽固体分散体及其稳定性 ·957·

生物活性肽根据自身不同的序列，可以表现出 分子质量<3000），上海海洋大学食品学院；EL-100
抗血栓、抗高血压、抗菌、抗糖尿病、抗氧化和免 （批号：C11679354）、HPMC（4000 mPa·s，批号：
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疫调节等功能 ，甚至可以通过作为辅助性佐剂的 C11679354），化学纯，上海麦克林生化科技有限公
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形式用于治疗/预防新型冠状病毒 。现代营养学研 司；DPP-Ⅳ抑制率试剂盒，北京博奥派克生物科技
究发现，膳食中的蛋白质经消化酶作用后，大多是 有限公司；三氯乙酸（TCA）、CuSO 4 •5H 2 O、酒石
以低聚肽的形式被人体所吸收和利用，以游离氨基 酸钾钠、NaOH、NaH 2 PO 4 、Na 2 HPO 4 ，AR，上海阿
酸的形式被吸收的比例并不高，且肽比游离氨基酸 拉丁生化科技股份有限公司；HCl，GR，南京化学
更容易被吸收，这表明肽的生物效价和营养价值都 试剂股份有限公司；无水乙醇，AR，国药集团化学
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高于游离氨基酸 。因此，生物活性肽被认为是新 试剂有限公司。
一代生物活性调节剂，可用于改善各种疾病的预防 RCZ-1B 型溶出试验箱，上海黄海药检仪器有
与治疗，从而提高人们的生活质量。 限公司；T6 新世纪紫外-可见分光光度计，北京普
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NONGONIERMA 等 总结了从奶（牛、骆驼和 析通用仪器有限责任公司；SU5000 热场发射扫描电
马）、猪、鱼、小麦和大型藻类（棕榈藻）等食物蛋 子显微镜，日本日立公司；真空冷冻干燥机，世友
白来源中提取的肽，其中 50 种对二肽基肽酶-Ⅳ 创业（北京）科技有限公司；傅里叶变换红外光谱仪，
（DPP-Ⅳ）半抑制浓度（IC 50 ）值小于 100 μmol/L， 赛默飞世尔科技（中国）有限公司；Talo L120C G2
其长度均在 2~17 个氨基酸残基之间。POWERB 等 [5] 型透射电子显微镜，美国 FEI 公司；FlexStation3 多
发现，乳清蛋白水解物可以抑制 DPP-Ⅳ活性。 功能微孔读板机（酶标仪），Molecular Devices 公司。
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UENISHI 等 从豪达奶酪的水溶性提取物中分离并 1.2 方法
最终合成对 DPP-Ⅳ有抑制作用的肽 LPQNIPPL，之 1.2.1 标准曲线的确定
后的小鼠动物实验进一步验证了该肽的效果。但是 参考文献[10]方法略作修改，用质量分数 5%的
活性肽不稳定，易受环境影响而变质，口服则易受 三氯乙酸（TCA）溶液分别配制质量浓度为 1.0、2.0、
消化道逆环境影响，被体内的蛋白酶分解而失去原 3.0、4.0、5.0 g/L 的降血糖肽标准溶液，然后各取
有的功能性，因此，如何提高活性肽的稳定性及其 6.0 mL 标准溶液，加入 4.0 mL 双缩脲试剂（由
生物利用率成为当前亟待解决的问题。在食品、药 CuSO 4 •5H 2 O、酒石酸钾钠、NaOH 配制），于漩涡
品研究领域，常通过固体分散体、微胶囊、脂质体、 混合仪上混合均匀，静置 30 min，5000 r/min 离心
纳米颗粒和乳液体系等方式来改善功能活性物质的 10 min，取上清液于 540 nm 下测定吸光度值（OD），
水溶性，提高其稳定性，控制递送、释放，进而提 并进行精密度和重复性实验。以吸光度为纵坐标，
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[7]
高其生物利用度 。CHRISTOPHERSEN 等 研究了 降血糖肽标准溶液质量浓度为横坐标进行回归分
含有不同类型脂质辅料的固体脂质颗粒在生物活性 2
析，得到方程 y = 0.056x–0.0017，R = 0.999，精密
肽释放后的降解机制，结果表明，溶菌酶在水溶液
度为 1.56%，重现性为 0.61%（n=3）。
中加入固体脂质颗粒比在固体中释放溶菌酶的速度
1.2.2 降血糖肽固体分散体的制备
要快得多。然而，固体脂质颗粒的疏水性限制了其 取一定量降血糖肽，加入到已经溶胀好的
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对亲水性多肽的包封性。KARAMANIDOU 等 开发
EL-100 水溶液〔m(EL-100)∶m(水)=1∶2〕中，再
了一种新的黏液渗透纳米乳化给药系统配方，加入
加入适量 HPMC，剧烈搅拌，并超声 15 min 使降血
了胰岛素/二肉豆蔻基磷脂酰甘油的疏水离子对，黏
糖肽与载体在溶剂中充分混合并分散，然后在真空
液的渗透性增强。但目前鲜见通过固体分散技术提
冷冻干燥机中冻干 48 h，得到降血糖肽固体分散体，
高活性肽稳定性和累积释放率的报道。
研磨过 200 目筛后在密闭、干燥条件下储存。
本研究以降血糖肽为模型，以尤特奇 L-100
1.2.3 载药率测定
（EL-100）为载体，羟丙基甲基纤维素（HPMC）
称取 100 mg 降血糖肽固体分散体，加入适量无
为释放调节剂，运用固体分散技术在维持活性的前
水乙醇，研磨使其完全破壁溶解。再加入少许水，
提下，提高降血糖肽的累积释放率和稳定性，为活
使降血糖肽充分溶解，反复洗涤后，收集洗涤液过
性肽的综合利用提供新的思路，以期为基于活性肽
滤，采用 1.2.1 节方法测定吸光度并计算降血糖肽质
的功能性食品开发提供一定的参考。
量浓度，按式（1）计算载药率。
1 实验部分 载药率 /%  m A  100 （1）
m B
1.1 试剂与仪器 式中：m A 为降血糖肽固体分散体中降血糖肽的质
降血糖肽（由脱脂南极磷虾粉酶解获得，相对 量，mg；m B 为加入降血糖肽的总质量，mg。