Page 112 - 《精细化工》2022年第5期

·966· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 39 卷

取 1 mg 尼罗红加入到 1 mL 异丙醇中配制尼罗红染 至消化液中。在 37 ℃水浴振荡器中，100 r/min 连
色液，同样配比配制尼罗蓝染色液。取两种染色液 续振荡 4 h，模拟小肠消化阶段。
各 50 μL 与 1 mL 新制乳液混合，25 ℃下避光磁力 1.2.7.4 槲皮素乳液凝胶生物利用率的测定
搅拌 30 min，对乳液进行染色。向染色后的乳液中 参照 CHEN 等 [20] 的方法略作修改，在模拟小肠
加入 GDL 至乳液最终 pH 为 4.5，取 1 μL 混合后的 消化阶段后，立即在冰水中冷却消化物。然后，将
乳液于载玻片上，盖好载玻片后除去气泡。在 40 ℃ 样品在 4 ℃离心（10000×g，40 min）。离心后，吸
下反应 2 h 后，将样品置于激光共聚焦显微镜下观 取中间胶束层，并使用 0.22 mm 过滤器过滤，用无
察，测试条件：激发波长分别为 633 和 488 nm [12] 。 水乙醇稀释滤液后，在 374 nm 波长下测量其吸光
1.2.7 槲皮素乳液凝胶的制备及运载性能测定 度。利用槲皮素-乙醇标准曲线计算槲皮素质量，槲
1.2.7.1 槲皮素乳液凝胶的制备 皮素乳液凝胶的生物利用率按式（6）计算：
参照 CHEN 等 [19] 方法略作修改，将 20 mg 槲皮 m
素溶解在无水乙醇中配成质量浓度为 6.6 g/L 溶液， 生物利用率 /% = m  100 （6）

在 65 ℃下加热 30 min，蒸发除去大部分无水乙醇。 式中：m'为胶束中槲皮素的质量，g；m"为原始乳液
然后，将 10 mL 大豆油加入上述槲皮素溶液中，得 凝胶样品中槲皮素的质量，g。
到含有槲皮素的油相，再按照 1.2.3 节方法制备槲皮 1.2.7.5 槲皮素乳液凝胶脂肪酸分解率的测定
素乳液及乳液凝胶。 参照 DU 等 [23] 的方法略作修改，在模拟小肠消
1.2.7.2 槲皮素乳液凝胶包封率的测定 化阶段时，不断滴加 0.25 mol/L NaOH 中和脂质消
参照 CHEN 等 [20] 和 LIU 等 [21] 的方法略作修改， 化释放的游离脂肪酸。滴加过程中，维持消化体系
测定槲皮素乳液凝胶的包封率。称量 50 mg 槲皮素 中的 pH=7.0，37 ℃恒温。记录乳液凝胶在 1、3、5、
乳液冻干粉末，将其分散在 2.5 mL 体积分数 25%无 10、20、60、90、120、150、180、210、240 min NaOH
水乙醇和 2.5 mL 体积分数 0.5%吐温 80 的水溶液中。 的消耗量，槲皮素乳液凝胶的脂肪酸分解率（FFAs，
在 4 ℃离心（10000×g，20 min），取离心管底部液 %）按式（7）计算：
体 1 mL，用无水乙醇稀释后，在 374 nm 波长下测 V  c  M
量其吸光度。利用槲皮素-无水乙醇标准曲线方程 FFAs / %  NaOH 2 NaOH oil  100 （7）
m
oil
2
（y=0.0621x–0.0023，R =0.9927，y 为槲皮素的吸光
式中：V NaOH 为滴加 NaOH 的体积，L；c NaOH 为滴加
度；x 为槲皮素的质量浓度，g/L）计算槲皮素质量， NaOH 的浓度，mol/L；M oil 为大豆油的平均摩尔质
槲皮素乳液凝胶的包封率（EE，%）按式（5）计算： 量，g/mol，m oil 为消化系统中油的质量，g。
m  m
EE / % = total outer  100 （5） 1.3 数据分析
m total 所有实验平行重复 3 次，结果以“平均值±标准
式中：m total 为加入油相中的槲皮素初始质量，g；
差”表示。以 SPSS 20.0 软件对数据进行 ANOVA
m outer 为外水相中未包封的槲皮素质量，g。
差异显著性分析，p<0.05 差异显著。使用 Origin V8.1
1.2.7.3 槲皮素乳液凝胶体外消化模型的构建 软件进行图表的绘制。
参照 PARK 等 [22] 的方法略作修改，将槲皮素乳
液凝胶用研杵和研臼碾压 2 min，制备咀嚼乳液凝胶 2 结果与讨论
样品。将 5 mL 人工唾液预热至 37 ℃后，两者混合
均匀。用 0.25 mol/L NaOH 缓慢调至消化液 pH 为 2.1 大豆分离蛋白乳液凝胶最佳制备条件的确定
6.8，在 37 ℃水浴振荡器中，100 r/min 连续振荡 2.1.1 乳液凝胶分子间作用力
10 min，模拟口腔消化阶段。 通过相对浊度（浊度差值）表征乳液凝胶中分
参照 DU 等 [23] 的方法略作修改，将 10 mL 模拟 子间作用力的原理如下：S 2 中的 Tris-Gly 溶液能够
胃液预热至 37 ℃后，加至消化液中。用 0.25 mol/L 破坏乳液凝胶的静电相互作用，S 3 中的 SDS 和尿素
NaOH 缓慢调至消化液 pH 为 2.0，在 37 ℃水浴振 能够破坏乳液凝胶中的非共价相互作用（包括疏水
荡器中，100 r/min 连续振荡 2 h，模拟胃消化阶段。 相互作用和氢键相互作用），S 4 中的 β-巯基乙醇能够
参照 DU 等 [23] 的方法略作修改，配制模拟小肠 破坏乳液凝胶中的二硫键，因此，乳液凝胶分散在
液。用 0.25 mol/L NaOH 调至消化液 pH 为 7.0，并 S 1 ~S 4 中的浊度会由于其内部相互作用的破坏而变
维持体系温度为 37 ℃。将含有质量浓度为 2.75 g/L 化，浊度的差值代表了乳液凝胶的分子间作用力。
CaCl 2 、16.4 g/L NaCl、3 g/L 胰酶和 9.45 g/L 胆汁盐 参与凝胶形成的分子间作用力包括静电相互作用、
的 20 mL 模拟肠液（pH=7.0）预热至 37 ℃后，加 非共价相互作用（疏水相互作用和氢键相互作用）