Page 135 - 《精细化工》2022年第9期

第 9 期 黄冬婷，等: 超声辅助离子液体提取人参多糖工艺及其抗氧化活性 ·1853·

1.4.1.1 不同离子液体种类对人参多糖提取量的影响 空白对照。再分别加入 100 µL 质量分数为 5%的苯
在料液比 1∶30、离子液体质量浓度 8 g/L、水 酚溶液，迅速加入 2.0 mL 浓硫酸（质量分数为 98%），
浴温度 70 ℃下超声 30 min，选用不同种类的离子 摇匀，于沸水浴中加热 30 min。冷却至室温后，空白
液体（水、1-乙基-3-甲基咪唑溴盐、1-丁基-3-甲基 溶液作对照，在 490 nm 波长处测定不同质量浓度葡萄
咪唑溴盐、1-己基-3-甲基咪唑溴盐、1-辛基-3-甲基 糖标准溶液的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄糖标
咪唑溴盐）进行提取，考察离子液体种类对人参多 准溶液质量浓度为横坐标，绘制葡萄糖标准曲线并得
糖提取量的影响。 到回归方程。
1.4.1.2 不同离子液体质量浓度对人参多糖提取量 精密吸取供试品溶液 200 µL，平行 6 份，按照
的影响 上述过程进行操作，并根据测得吸光度值计算总糖
选取 1-己基-3-甲基咪唑溴盐水溶液为提取剂， 含量（质量分数）。
料液比 1∶30，水浴温度 70 ℃下超声 30 min，设定 1.6 人参多糖单糖组成测定
不同的离子液体质量浓度（2、4、6、8、10 g/L）， 采用高效液相色谱仪对人参多糖的单糖成分进
考察离子液体质量浓度对人参多糖提取量的影响。 行测试。
1.4.1.3 料液比对人参多糖提取量的影响 1.6.1 样品纯化
选取 8 g/L 1-己基-3-甲基咪唑溴盐水溶液为提 利用 α-淀粉酶去除人参多糖的淀粉。称量 5.00 g
取剂，水浴温度 70 ℃下超声 30 min，设定不同的 人参多糖，溶于 500 mL 去离子水，配成人参多糖质
料液比〔1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50（g∶ 量浓度 10 g/L 的溶液，将 400 U α-淀粉酶加入到人
mL）〕，考察料液比对人参多糖提取量的影响。 参多糖溶液中，55 ℃酶解 30 min，在沸水浴中加热
1.4.1.4 超声时间对人参多糖提取量的影响 5 min 终止酶解反应。溶液降温至室温后，离心去除
选取 8 g/L 1-己基-3-甲基咪唑溴盐水溶液为提 沉淀，收集上清液。
取剂，料液比 1∶30，水浴温度 70 ℃，设定不同的 利用木瓜蛋白酶去除人参多糖中的蛋白质。将
超声时间（10、20、30、40、50 min），考察超声时 100 U 木瓜蛋白酶加入上述去除淀粉后的人参多糖
间对人参多糖提取量的影响。 溶液中，35 ℃酶解 2 h，在沸水浴中加热 5 min 终
1.4.1.5 超声温度对人参多糖提取量的影响 止酶解反应。溶液降温至室温后，离心去除沉淀，
选取 8 g/L 1-己基-3-甲基咪唑溴盐水溶液为提 收集上清液。将上清液加热浓缩至 40 mL，加入
取剂，料液比 1∶30，超声 30 min，设定不同的超 160 mL 无水乙醇，摇匀，–20 ℃冰箱冻存静置 24 h
声温度（40、50、60、70、80 ℃），考察超声温度 以上，过滤得到白色固体，将白色固体烘干（60 ℃）
对人参多糖提取量的影响。 得 2.50 g 酶解后的人参多糖。
1.4.2 正交实验 取 1.00 g 酶解后的人参多糖溶于 10 mL 去离子
单因素实验初步确定提取参数变量范围后，以 水中，采用 DEAE-52 纤维素阴离子交换层析柱对人
单因素实验结果为基础，对离子液体质量浓度、料 参多糖进行纯化。用 2 倍柱体积蒸馏水进行洗脱。
液比、超声时间和超声温度进行四因素三水平正交 试管收集，每管收集 8 mL。采用苯酚-硫酸法对每
实验，优化人参多糖的提取工艺。 管溶液的吸光度进行检测，对在 490 nm 处出现吸收
1.5 人参多糖总糖含量的测定 峰的溶液进行收集，将收集的溶液–40 ℃冷冻干燥
溶液配制：精密称取在 105 ℃下干燥至恒重的 得到 0.6669 g 纯化后的人参多糖。
无水葡萄糖粉末 1 g，置于 100 mL 容量瓶中，加蒸 1.6.2 样品水解
馏水溶解稀释至刻度，摇匀，即得 10.0 g/L 的标准 称取 5 mg 纯化后的人参多糖置于水热反应釜
品储备液。精密吸取 0.50 mL 10.0 g/L 的葡萄糖储备 中，加入 4 mL 三氟乙酸密封，置于 110 ℃烘箱中
液于 10 mL 容量瓶，加蒸馏水定容至刻度，摇匀， 反应 4 h。反应结束后，自然冷却至室温，加入甲醇
即得 0.50 g/L 葡萄糖标准溶液；精密称取人参多糖 多次旋蒸，除去三氟乙酸，得到水解样品，备用。
25.0 mg，置于 50 mL 容量瓶中，加蒸馏水溶解稀释 1.6.3 待测样品衍生
至刻度，摇匀，即得 0.5 g/L 的供试品溶液；精密称 精密移取 4.0 mL 水至水解样品中，超声溶解。
取 5.0 g 苯酚，用 95 g 热水溶解即得质量分数为 5% 精确吸取 250 μL 样品溶液到 5 mL 离心管中，加入
的苯酚溶液。 250 μL 0.6 mol/L NaOH 溶液和 500 μL 0.4 mol/L
分别精密吸取 0.5 g/L 的葡萄糖标准溶液（20、 PMP-甲醇溶液，70 ℃反应 1 h。冷水中冷却 10 min；
40、60、80、120、140 µL）于 10 mL 具塞玻璃试管 加入 500 μL 0.3 mol/L HCl 溶液中和，再加入 1 mL
中，加蒸馏水补足至 200 µL，另取 200 µL 蒸馏水作 氯仿涡旋振荡 1 min，3000 r/min 离心 10 min，小心