Page 136 - 《精细化工》2022年第9期

·1854· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 39 卷

取上清，萃取 3 次。取上清液，即得衍生的待测样品。 度为 50、100、200、400、800、1000、1500 mg/L
1.6.4 对照标准溶液衍生 的人参多糖溶液，配制质量浓度为 0.5、1、2、4、8、
精密称取甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、 10、15 mg/L 的抗坏血酸溶液。分别量取 50 μL 不同
半乳糖醛酸、N-乙酰-氨基葡萄糖、葡萄糖、N-乙酰- 浓度人参多糖溶液和抗坏血酸溶液加入 96 孔板中，
氨基半乳糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖对 每孔再加入 100 µL ABTS•工作液，混匀，室温下静
照品各 50 μg，全部固体混合后加水溶解并定容至 置 6 min，在 734 nm 的紫外吸收波长下测定样品或
1 mL，即得混合对照溶液。精确吸取 250 μL 混合对 对照组的吸光度（A 12 ）。以无水乙醇代替 ABTS•工
照溶液到 5 mL 离心管中，后续衍生步骤同待测样品 作液测定的吸光度记为 A 22 ，以蒸馏水代替样品溶液
衍生步骤。 或抗坏血酸溶液测定的吸光度记为 A 02 。按照式（5）
HPLC 检测条件：色谱柱 Xtimate C18（4.6 mm× 计算人参多糖和抗坏血酸对 ABTS 自由基的清除率 [22] ：
200 mm×5 μm）；柱温 30 ℃；流动相 V(0.05 mol/L ABTS•清除率/%=[A 02 –(A 12 –A 22 )]/A 02 ×100 （5）
磷 酸二氢钾 溶液 ) ∶ V( 乙腈 )=83 ∶ 17 ；流速
1.0 mL/min；检测波长 250 nm；进样量 20 μL。 2 结果与讨论
1.7 人参多糖抗氧化活性测定
2.1 单因素实验
1.7.1 人参多糖对 DPPH•的清除能力 离子液体种类、离子液体质量浓度、料液比、
按照文献 [19] 的方法，称取 DPPH•粉末用无水乙
超声时间、超声温度对人参多糖提取量的影响见
醇溶解，配制成 0.2 mmol/L 的 DPPH•溶液；分别配
图 1。
制质量浓度为 25、50、200、400、800 mg/L 的人参
多糖溶液和抗坏血酸溶液。分别量取 100 μL 不同浓
度人参多糖溶液和抗坏血酸溶液加入 96 孔板中，每
孔再加入 100 µL DPPH•溶液，混匀，室温下静置
30 min，在 517 nm 的紫外吸收波长下测定样品或对
照组的吸光度（A 1 ）。以样品溶液或抗坏血酸溶液加
蒸馏水测定的吸光度记为 A 2 。以蒸馏水加 DPPH•
溶液测定的吸光度记为 A 0 。按照式（3）计算人参
多糖和抗坏血酸对 DPPH•的清除率 [20] ：
DPPH•清除率/%=[A 0 –(A 1 –A 2 )]/A 0 ×100 （3）
1.7.2 人参多糖对•OH 的清除能力
依次配制浓度为 6 mmol/L 的水杨酸-乙醇溶液、
硫酸亚铁溶液和过氧化氢溶液；分别配制质量浓度
为 50、100、200、400、800、1000、1500 mg/L 的
人参多糖溶液和抗坏血酸溶液。分别量取 50 μL 不
同浓度人参多糖溶液和抗坏血酸溶液加入 96 孔板
中，每孔再依次加入 50 µL 硫酸亚铁溶液、过氧化
氢溶液，混匀，静置 10 min，最后加入 50 µL 水杨
酸溶液。37 ℃保温 30 min，在 510 nm 的紫外吸收
波长下测定样品或对照组的吸光度（A 11 ）。以蒸馏
水代替水杨酸溶液测定的吸光度记为 A 21 ，以蒸馏水
代替样品溶液或抗坏血酸溶液测定的吸光度记为
A 01 。按照式（4）计算人参多糖和抗坏血酸对羟基
自由基的清除率 [21] ：
•OH 清除率/%=[A 01 –(A 11 –A 21 )]/A 01 ×100 （4）
1.7.3 人参多糖对 ABTS•的清除能力
取 7.4 mmol/L 的 ABTS 溶液 0.5 mL 与 2.6 mmol/L
的过硫酸钾溶液 0.5 mL 混合，避光室温放置 12 h，
加蒸馏水稀释 30~40 倍，使其在 734 nm 波长处吸光
度处于 0.68~0.72，即得 ABTS•工作液。配制质量浓