Page 192 - 《精细化工》2022年第9期
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·1910·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 39 卷

            搅拌，使其完全溶解，此为水相；待水相冷却至室                             液用一级去离子水稀释 500 倍，以质量浓度为 0.2 g/L
            温，混合油相与水相，然后用台式实验型微射流均                             的尼罗红乙醇溶液染色，混合均匀，取约 10  μL 滴
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            质机以 1.2×10  r/min 搅拌 2 min，制得粗乳液，将粗                加在载玻片上，盖上盖玻片，将载玻片倒置于物镜
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            乳液在 1.0×10 Pa 压力下均质循环 3 次，即获得姜酮                    下（×10）,使用激光共聚焦显微镜对消化前后的纳
            酚纳米乳液，最终乳液中姜酮酚质量浓度为 1 g/L。                         米乳液进行微观结构观察           [24] 。
            1.3   性能测试、表征方法                                    1.3.4   游离脂肪酸释放率的测定
            1.3.1   纳米乳液物理性质的测定                                    参照 SILVA 等   [25] 的方法，根据整个小肠模拟阶
                 为降低光多重散射效应          [15] ，将纳米乳液用去离            段 NaOH 标准溶液的滴加量计算在胰脂肪酶作用下
            子水稀释 500 倍，使用纳米粒度电位仪检测纳米乳                          水解的游离脂肪酸含量，进而测定释放出的脂肪酸与
            液的平均粒径与 Zeta 电位，设置颗粒折射率为 1.47，                     初始菜籽油添加量的比例，另用一级去离子水代替乳
            分散剂折射率为 1.33。                                      液设置一组空白对照，以尽量消除滴定后期因碳酸存
            1.3.2   姜酮酚纳米乳液的体外模拟消化                             在造成的干扰。脂肪酸释放率按式（1）进行计算：
                 上述制备的乳液依次进行口腔、胃和小肠的体                                   脂肪酸释放率      /%   Vc M    100   （1）
            外模拟消化实验        [23] 。口腔阶段：在 20 mL 质量浓度                                         2 m
            为 1 g/L 姜酮酚纳米乳液中加入 20 mL 模拟唾液（黏                    式中：V 为滴定过程中消耗的 NaOH 标准溶液体积，
            蛋白质量浓度为 30 g/L），并用 0.10 mol/L 的 NaOH               L；c 为 NaOH 标准溶液浓度，mol/L；M 为菜籽油的
            标准溶液调节 pH 至 6.8，在 100 r/min、37  ℃下反                平均摩尔质量，940 g/mol；m 为初始菜籽油质量，g。
            应 10 min，获模拟唾液样品。胃阶段：取 20 mL 模                     1.3.5   姜酮酚在纳米乳液中的生物可及率
            拟唾液样品，加入 20 mL 模拟胃液，用 0.10 mol/L                       参照 SUN 等   [17] 及 LEVITA 等 [26] 的方法，小肠消
            的 NaOH 标准溶液调节 pH 至 2.5，在 100 r/min、37 ℃            化阶段结束后，取全部小肠消化液于 37  ℃、13523 g
            下反应 2 h，获模拟胃液样品。小肠阶段：取 30 mL                       离心 30 min，离心结束后，溶液可分为 3 层，下层
            模拟胃液样品，加入 1.5 mL 小肠盐溶液（配方见表                        为未被消化不透明沉淀，中层为透明或稍显浑浊                     [15] 的
            2）、2.5 mL 质量浓度为 24 g/L 的胰脂肪酶磷酸缓冲                   胶体，上层呈油状或奶油状。取中间相，即溶有姜酮
            盐溶液（PBS，浓度为 0.01 mol/L，pH=7.0）、3.5 mL              酚的胶束相，添加小肠消化液 4 倍体积乙酸乙酯，
            质量浓度为 53.6 g/L 的胆盐 PBS 悬浊液（PBS 浓度                  混合，室温振荡 5 min，13523 g 离心 10 min，重复
            为 0.01 mol/L，pH=7.0），用 0.10 mol/L 的 NaOH 标         2 次，合并 3 次上清液，于真空浓缩仪中挥干乙酸
            准溶液调节 pH 至 7.0，在 100 r/min、37  ℃下反应 2 h，           乙酯，沉淀用乙腈溶解，定容至 1 mL，使用高效液
            整个过程通过滴定维持pH为7.0，从加入胰脂肪酶起，                         相色谱于 284 nm 波长下测量其响应值（峰面积，y），
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            开始记录添加量（前期酶促反应速度过快，为保证                             根据 y=7064.7x－0.6137（R =0.9997）得到 m 1 （x 为
            实验准确性，前 10 min 以高浓度即 0.10 mol/L 的                  姜酮酚的质量浓度，mg/L），其生物可及率的计算
            NaOH 标准溶液、之后使用 0.02 mol/L 的 NaOH 标                 如式（2）所示：
            准溶液滴定）。消化后收集的唾液、胃液、小肠液                                                        m
                                                                           生物可及率     /%   1    100    （2）
            采用激光粒度分析仪与纳米粒度电位仪进行粒径分                                                        m 0
            布与 Zeta 电位测量，在使用一级去离子水稀释时，                         式中：m 1 为胶束中姜酮酚的质量，mg；m 0 为初始
            需调节至与消化液各阶段相应 pH 一致，即分别将                           姜酮酚的质量，mg。
            稀释液 pH 调节至 6.8、2.5 和 7.0。使用激光粒度分                   1.3.6   乳液粒径储存稳定性
            析仪测量纳米乳液粒径分布，检测模式为球型模式。                                将 4 种纳米乳液（Ⅰ~Ⅳ）置于 25  ℃恒温箱中，
            缓慢将纳米乳液滴加至约 400 mL 一级去离子水中，                        于第 5、10、15、20、25、30 d 测定其平均粒径，
            待稀释液遮光率至 8%，记录粒径分布数据                   [22] 。      观察其粒径储存稳定性          [24] 。
                                                               1.4   数据处理
                        表 2   人工小肠盐溶液配方
                Table 2    Formula of artificial intestinal salt juice   各数据以“平均数±标准差”表示，使用 Origin2021、
                      化合物                   添加量/g              Excel2010 作图，SPSS Statistics23 软件进行数据处
                    CaCl 2•2H 2O             18.377            理分析。
                    NaCl                    109.575
                 注：定容至 500 mL。                                 2   结果与讨论

            1.3.3   乳液及消化液的微观结构观察                              2.1   纳米乳液粒径与 Zeta 电位测量
                 将纳米乳液、口腔消化液、胃消化液和小肠消化                             平均粒径是衡量乳液是否为纳米乳液的直接及
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