Page 157 - 《精细化工》2023年第1期

第 1 期 王 颖，等: 基于山苍子精油的复配筛选及协同抗菌性能 ·149·

续表 1
分值 香气强度 喜好度 舒适度 留香持久度
1 基本闻不出香气 难闻的气味较重，使人不愉快，喜好 香气舒适度极弱，气味令人排斥 基本无留香
度极低
0 闻不出香气 难闻的气味使人不能忍受，不喜欢 香气舒适度最弱，气味使人厌恶 无留香

1.2.5 细菌生长曲线测定 MIC 测定结果见表 2。
7
以浓度为 1.0×10 CFU/mL 大肠杆菌为供试菌
表 2 13 种单一精油的 MIC
种。分别将山苍子精油、肉桂精油及复配精油〔V(山 Table 2 MIC of 13 kinds of single essential oils
苍子精油)∶V(肉桂精油)=2∶1〕以质量浓度为 0.5 g/L
MIC/（g/L）
加入到上述菌液中，以不加精油为空白对照组，在 香韵分类 精油种类
大肠杆菌 金黄色葡萄球菌
37 ℃、200 r/min 无菌摇床中持续培养，分别于 0、
果香 山苍子精油 1 0.5
6、12、24、48 h 测定各组菌液的 OD 600 ，测试并扣
花香 天竺葵精油 0.5 0.5
除相应测试精油在 600 nm 处的吸光度，取 3 次重复 薰衣草精油 1 0.5
实验的平均值，绘制细菌生长曲线。 青香 薄荷精油 0.5 1
1.2.6 复配精油对供试菌相对电导率的影响 茶树精油 2 1
采用相对电导率变化评价细菌胞内离子外流及 草香 香茅精油 0.125 1
细胞膜破坏情况。将大肠杆菌培养至对数生长期， 百里香精油 0.5 0.5
取部分菌液离心，收集沉淀并用质量分数为 5%葡萄 柠檬草精油 0.5 0.5
糖溶液洗涤两次并重悬至上清液电导率接近质量分 鼠尾草精油 1 1
数 5%葡萄糖溶液的电导率，以去除细菌表面黏附的 辛香 肉桂精油 0.25 0.5
电解质，记为 L0。将山苍子精油、肉桂精油及复配 丁香精油 0.25 2
精油〔V(山苍子精油)∶V(肉桂精油)=2∶1〕以质量 牛至精油 0.25 0.25
浓度为 0.5 g/L 加入质量分数为 5%葡萄糖溶液中，混合 罗勒精油 0.5 1

7
均匀后测定电导率，记为L1。随后，加入1.0×10 CFU/mL 由表 2 可知，13 种植物精油的 MIC 值不同，对
菌液混合均匀，于 37 ℃、200 r/min 持续培养，分 革兰氏阴性菌和阳性菌具有不同抗菌效果。肉桂精
别测定 0、2、4、6 和 8 h 的电导率，记为 L2。将 油、牛至精油、百里香精油对大肠杆菌和金黄色葡
7
含有 1.0×10 CFU/mL 菌液的质量分数为 5%葡萄糖 萄球菌的MIC值分别为0.25和0.5 g/L、0.25和0.25 g/L、
溶液在沸水中处理 5 min，测定其电导率，记为 L0′， 0.5 和 0.5 g/L，具有较好的抗菌效果，与文献报道
相对电导率计算公式如式（2）所示： 一致 [13,17] 。精油的抗菌活性与其活性成分有关，肉
L2 L1
相对电导率/%= ×100 （2） 桂精油的主要成分肉桂醛可与微生物细胞膜表面离
L0' L0 子通道蛋白相互作用，改变微生物细胞膜的通透性，
1.2.7 复配精油对供试菌细胞内容物泄漏程度影响
导致细胞质渗漏，影响微生物的生物活性 [13] 。百里
采用分光光度法测定精油对细菌细胞内容物质
香精油中的香芹酚和百里香酚可与细菌细胞膜上的
泄漏的影响。将大肠杆菌培养至对数期，8000 r/min
磷脂双分子层相互作用，导致物理结构的扭曲（膜
离心 6 min，用无菌 PBS（0.1 mol/L，pH 7.4）洗涤 3 的膨胀和不稳定）并增加膜的流动性和通透性，从
6
次，重悬并用无菌 PBS 稀释至浓度为 1.0×10 CFU/mL， [8,18]
而抑制细菌生长 。牛至精油的主要成分香芹酚也
随后加入质量浓度分别为 0.25、0.5 和 1 g/L 的山苍 + +
可通过破坏微生物的膜结构，导致细胞内 Na 、K 等
子精油、肉桂精油及复配精油〔V(山苍子精油)∶ [19]
内容物渗漏，影响微生物细胞的正常生理代谢 。
V(肉桂精油)=2∶1〕，于 37 ℃、200 r/min 培养 4 h
山苍子精油的主要成分为柠檬醛，可与微生物
后，用 0.22 μm 滤膜过滤，取滤液测定波长 260 nm
的 DNA 形成嵌合体，抑制细菌生物活性，从而发挥
处的吸光度（OD 260 ），分析并评价精油的加入对细
山苍子精油的抗菌效果 [20-21] 。因此，将山苍子精油
菌胞内紫外吸收物质即细菌细胞内容物泄漏的影
与肉桂精油、牛至精油或百里香精油进行复配，研
响，OD 260 越大表明细菌细胞内容物泄漏程度越高。
究其联合抗菌性能。
2 结果与讨论 2.2 复配精油的联合抗菌活性结果
采用棋盘稀释法对山苍子精油、肉桂精油、牛
2.1 单一精油的 MIC 结果 至精油、百里香精油和不同种类复配精油的联合抗
单一植物精油对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的 菌活性进行测试，并以 FIC 指数对抑菌活性进行评