Page 208 - 《精细化工》2023年第6期
P. 208
·1358· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 40 卷
烘箱中干燥 48 h，得到 7.62 g PM。 PM、PyA-g-PM、SyA-g-PM、VA-g-PM、IsA-g-PM、
1.2.2 PM-EDA 中间体的合成 SA-g-PM。
PM-EDA 的制备参照文献 [10] ，但稍有修改，具 PA-g-PM 接枝率采用 Folin-Ciocalteu 方法测定 [15] 。
体步骤为：将 0.30 g（约 0.0015 mol）PM 加入到装 具体步骤如下：准确称取 0.01 g PA-g-PM 加入到
有 50 mL 蒸馏水的三口烧瓶中，搅拌溶解，接着按 20 mL 蒸馏水中搅拌直到完全溶解。将 1.0 mL 已稀
n(PM)∶n〔1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺 释好的 Folin-Ciocalteu 试剂（主要成分磷钨钼酸）
(EDC)〕∶n〔N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)〕=1∶1∶1、 与 0.5 mL 样品溶液混和均匀后，于 30 ℃暗处反应
1∶2∶1、1∶2∶2、1∶4∶2、1∶5∶2 向烧瓶中分 5 min，接着加入 2.0 mL 饱和 NaHCO 3 溶液继续反
别加入 EDC 和 NHS，搅拌 10 min 后，按 PM 中 应 1.0 h，分光光度法测定该混合溶液在 747 nm 波
n(PM)∶n(EDA)=1∶1、1∶1.5、1∶2、1∶2.5、1∶ 长下的吸光度。将 0.10 g/L 的 GA 溶液稀释成不同
3 向反应体系中逐滴加入 EDA，用 0.1 mol/L 盐酸溶 浓度梯度，横坐标为 GA 质量浓度（g/L），纵坐标
液调节体系 pH 至 6.0、7.0、7.5、8.0、9.0，在室温 为吸光度 ， 标准曲线 的 拟合方程 为 y=0.14267+
2
下连续搅拌反应 8、12、18、24、36 h，以取代度为 31.36061x， R =0.9979 。通过 拟合方程计 算得 到
指标优化中间体 PM-EDA 的制备条件。反应物于大 PA-g-PM 中酚酸的接枝率，聚合物中酚酸的接枝率
量的无水乙醇中沉降，过滤，获得的白色滤渣用无 以每克接枝共聚物中 GA 的毫克数表示（mg GA/g）。
水乙醇洗涤 2~3 次。将洗净的滤渣复溶于 50 mL 蒸 以蒸馏水作空白，用作分光光度计的调零校准。
馏水中透析（截留相对分子质量为 3500）48 h，最 1.3 表征
后将透析袋中溶液于–55 ℃冷冻干燥 48 h，得到中 UV-Vis：样品配制成适当浓度溶液，采用紫外-
间体 PM-EDA。 可见分光光度计扫描 200~500 nm 波长范围内的图谱。
利用反式酸碱滴定法 [13] 测定聚合物中相应的游 FTIR：取少量样品分别与干燥的溴化钾研磨，
离羧酸基团，以此换算海藻酸钠的取代度：称取 混合均匀，然后将混合粉末压制成 1 mm 的薄片，
–1
0.10 g PM-EDA 溶于 100 mL 浓度为 0.1 mol/L 的 采用傅里叶变换红外光谱仪扫描 4000~400 cm 范
NaOH 溶液中，加入几滴酚酞作指示剂，用 0.3 mol/L 围内的图谱。
的 HCl 反滴定。取代度（DS）根据式（1）计算: XRD：样品平铺在 XRD 样品池。采用 X 射线
DS/%=[1–(0.01–0.3×V 1 )/(0.01–0.3V 2 )]×100 （1） 多晶粉末衍射仪进行 XRD 扫描。设置条件为：辐射
式中：0.01 为 NaOH 的物质的量，mol；0.3 为 HCl 源铜靶，电压 40 kV，电流 40 mA，扫描范围 2θ=
的浓度，mol/L；V 1 为滴定 PM-EDA 所消耗的 HCl 5°~70°，扫描步长 0.02°，扫描速率 5 (°)/min。
的体积，L；V 2 为滴定 PM 所消耗的盐酸体积，L。 1.4 抗氧化活性测定
1.2.3 PA-g-PM 的制备 PA-g-PM 和 V C 均配制成 0.5 g/L 的样品溶液。
PA-g-PM 的制备方法参照壳聚糖接枝酚酸的方 DPPH 自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基清
法 [14] 进行，步骤如下：向装有 20 mL 蒸馏水的圆底 除率以及铁还原力测定参考文献 [16-17] ，但稍作修
烧瓶中加入 0.12 g 取代度最高的 PM-EDA，溶解后， 改，具体步骤如下。每个样品做 3 组平行，结果取
加入 0.14 g 1-羟基苯并三唑（HOBt），然后将圆底 平均值。
烧瓶置于 25 ℃油浴锅中连续搅拌至溶液澄清，分 DPPH 自由基清除率：配制 0.1 mmol/L 的
别向溶液中加入 0.17 g 没食子酸（GA），待 GA 溶 DPPH 甲醇溶液。实验组：分别移取 25、50、100、
解后，逐滴加入无水乙醇溶解的 EDC（0.19 g EDC 200、400 µL 样品溶液于 2 mL 离心管中，加入蒸馏
溶于 2.0 mL 无水乙醇中），在 25 ℃下反应 24 h 后， 水配成总体积为 500 µL 的溶液，然后再向每支离心
所得溶液于大量无水乙醇中沉降，过滤，获得的白 管中分别加入 500 µL 的 DPPH 甲醇溶液，摇匀。用
色滤渣用无水乙醇洗涤 2 ~ 3 次。所得沉淀物复溶于 500 µL 甲醇代替实验组中的 DPPH 甲醇溶液作阴性
50 mL 蒸馏水后置于截留相对分子质量为 3500 的透 对照组。500 µL 蒸馏水代替实验组中样品溶液作空
析袋中透析 48 h，透析袋中溶液于–55 ℃冷冻干燥 白组。各离心管中溶液混合均匀后，室温避光静置
48 h 得到最终产物 GA-g-PM。 30 min，然后采用紫外-可见分光光度计测定 517 nm
0.15 g 原儿茶酸（PrA）、0.15 g 龙胆酸（GtA）、 波长处的吸光度。根据式（2）计算 DPPH 自由基的
0.15 g 焦儿茶酸（PyA）、0.20 丁香酸（SyA）、0.17 g 清除率。
香草酸（VA）、0.17 g 异香草酸（IsA）、0.14 g 水杨 羟基自由基的清除率：配制 9 mmol/L 的水杨酸
酸（SA）分别替代 0.17 g GA 参与上述反应，其他 乙醇溶液、FeSO 4 •7H 2 O 水溶液和 H 2 O 2 水溶液。实
步骤与上述方法相同，分别制得 PrA-g-PM、GtA-g- 验组：分别移取 37.5、75、150、300、600 µL 样品
