Page 126 - 《精细化工》2023年第9期

·1974· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 40 卷

株，正突变率为 27.2%，比不经过癸酸钠压力筛选 RR-447 高产性能相对稳定，其中，菌株 RR- 447 达托
条件下约高出 10%，其中有 15 株突变菌株的达托 霉素产量最高，摇瓶产量为(101.41±0.37) mg/L，是出
霉素产量>90 mg/L。 发菌株的 2.44 倍。
对 58 株正突变菌株进行复筛，每株菌设置 3 组
平行实验，结果见图 7。由图 7 可知，最终得到 6
株产量>90 mg/L 的高产突变菌株 RR-449、RR-408、
RR-392、RR-436、RR-447 和 RR-451，摇瓶产量分
别为 (92.88±0.51) 、 (94.47±1.31) 、 (98.10±0.57) 、
(99.72±0.20)、(101.41±0.37)和(104.37±0.91) mg/L。
2.7 高产菌株遗传稳定性分析
对复筛得到的 6 株产量较高的癸酸钠耐受突变
菌株进行遗传稳定性实验，结果如表 1 所示。
由表 1 可知，菌株 RR-408、RR-436、RR-451 传
图 7 复合诱变结合癸酸钠耐受性复筛结果
至第五代时产量比第一代分别约降低了 23.2%、23.3%、
Fig. 7 Re-screening results of compound mutagenesis
17.1%，高产性能不稳定。菌株 RR-449、RR-392、 combined with sodium decanoate tolerance

表 1 达托霉素高产菌株遗传稳定性
Table 1 Genetic stability test of high yield strains of daptomycin
菌株 第一代产量/(mg/L) 第二代产量/(mg/L) 第三代产量/(mg/L) 第四代产量/(mg/L) 第五代产量/(mg/L)
RR-449 92.88±0.51 90.31±1.07 91.64±1.62 91.73±0.73 90.96±1.10
RR-408 94.47±1.31 90.11±0.22 80.19±0.82 82.38±0.39 72.57±1.25
RR-392 98.10±0.57 99.07±0.34 98.19±1.27 97.54±1.20 96.43±0.66
RR-436 99.72±0.20 89.44±0.39 86.29±0.94 80.57±0.53 76.49±1.12
RR-447 101.41±0.37 100.62±1.12 102.72±0.46 101.85±0.51 101.37±0.28
RR-451 104.37±0.91 103.86±1.31 102.76±0.53 95.49±0.80 86.52±0.92

2.8 高产菌株的形态学特征 缠绕较为紧密，而 RR-447 的菌丝球菌丝较为松散。
2.8.1 菌落形态 松散的菌丝球可以增加细胞间氧气传递效率，致使
原始菌株 AN-126 与高产菌株 RR-447 的菌落形 其代谢旺盛，从而提高达托霉素的产量。
态如图 8 所示。

a—AN-126；b—RR-447
图 9 AN-126 和 RR-447 的菌丝球形态

a—AN-126；b—RR-447 Fig. 9 Mycelial morphology of strains AN-126 and RR-447
图 8 AN-126 与 RR-447 的菌落形态
Fig. 8 Colony morphology of strains AN-126 and RR-447 2.9 高产菌株的遗传学特征
BOX-PCR 指纹谱图分析技术是检测微生物多态
由图 8 可知，菌株 AN-126 产生浅绿色色素， 性的一种方法，可以反映菌株之间的基因组 DNA 水平
而高产菌株 RR-447 产生的色素呈粉红色，说明经 上的差异 [24] 。采用 BOX-PCR 对出发菌株 AN-126 和
过复合诱变后，菌株的菌落形态发生明显变化。 高产菌株 RR-447 进行多态性分析，结果如图 10 所示。
2.8.2 菌丝球形态 由图 10 可见，BOX 引物扩增出的条带均在 0.25~2.00
原始菌株 AN-126 与高产菌株 RR-447 的菌丝球 kb 之间，但高产菌株 RR-447 在 1.50~ 2.00 kb 之
形态如图 9 所示。由图 9 可知，在显微镜下观察菌 间存在一条特异性条带，说明经过复合诱变后，菌
株的菌丝球形态发现，菌株 AN-126 的菌丝球菌丝 株在基因水平发生突变。