Page 188 - 《精细化工》2023年第9期
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·2036·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 40 卷

            液与 GSPI 储备液按体积比 1∶1 混合，得到 GSPI/                    柠檬酸盐缓冲液（50 mmol/L，pH 3.0）中 2 h 后，
            果胶混合液，其中 GSPI 质量浓度为 120 g/L，果胶                     将复合凝胶在室温下 3000 g 离心 10 min。用双缩脲
            质量浓度为 5 g/L。将不同质量 CaCl 2 粉末加入 GSPI/                法 [28] 测定 GSPI/果胶复合凝胶溶出上清液中的蛋白
                                2+
            果胶混合液中，使 Ca 最终质量浓度分别为 0.05、                        含量。蛋白浸出率（%）为溶出的蛋白质量占凝胶
            0.11 和 0.22 g/L，并用 1 mol/L HCl 调节混合液的 pH           中总蛋白质量的百分比。对浸出的蛋白组分进行聚
            至 6.0，得到成胶溶液（即 GSPI/果胶溶胶），分别                       丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析。
            记为 GSPI/DE-38%和 GSPI/DE-76%。                       1.2.8   复合凝胶浸出蛋白组分的 SDS-PAGE 实验
                 GSPI/果胶复合凝胶的制备：将 6 mL 成胶溶液                        将 1.2.7 节离心后的浸出液用去离子水稀释 10
            用保鲜膜密封在小烧杯中，室温下磁力搅拌 1 h，然                          倍后，参照 LAEMMLI       [29] 的方法进行 SDS-PAGE 测
            后在恒温水浴锅中升温到 90  ℃，加热 30 min。将                      试。将 GSPI/果胶复合凝胶与等体积缓冲液（含体
            加热后的溶液冷却至室温，并在 4  ℃下储存过夜，                          积分数 5%  β-ME 或 0.125 g/L NEM）混合，煮沸 3
            得到固体复合凝胶。                                          min。每孔上样量为 15 µL。浓缩胶和分离胶质量浓
            1.2.3   溶胶粒径与 ζ-电位测定                               度分别为 5 g/L 丙烯酰胺和 120 g/L 丙烯酰胺。电泳
                 参考马天怡等      [25] 方法作适当修改，用纳米粒度                结束后，用质量浓度为 10 g/L 的考马斯亮蓝 R-250
            及 Zeta 电位分析仪测定溶胶的粒度大小和 ζ-电位。                       （溶于体积分数 50%甲醇和 6.8%冰乙酸）染色 3 h，
            测试前，用 20 mmol/L 的磷酸盐缓冲盐（pH=6.0）                    然后用脱色液（体积分数 5%甲醇和 7.5%冰乙酸）
            将溶胶中蛋白质量浓度稀释至 2 g/L，以避免浓度过                         脱色直至条带清晰无背景色。
            高而导致多重散射效应。                                        1.2.9   复合凝胶的 FTIR 测定
            1.2.4   溶胶流变学特性测定                                      用溴化钾（KBr）压片法对样品进行预处理，
                 参照 HE 等   [23] 的方法，用流变仪测试溶胶的流                 约 1 mg 冻干复合凝胶与 KBr 混匀（质量比 1∶99）
            变性能。在间距 40 mm 两平行板之间放置约 1.0 mL                     研磨成细粉并压片，测量前扫描背景通道光谱，测
            溶胶，间隙的高度设置为 1 mm。开始测量前，样品                          试波数范围 4000~400 cm ，扫描次数为 64，分辨
                                                                                      –1
            在测量温度（25  ℃）下平衡 1 min。样品外缘涂有                       率为 4 cm 。
                                                                       –1
            少量硅油，以防止水分蒸发。在样品的线性黏弹性                             1.2.10   复合凝胶的微观结构测定
            区域选定应变为 1.0%、频率为 1.0 Hz，先将样品从
                                                                   用环境扫描电子显微镜观察凝胶的微观结构。
            25  ℃加热至 90  ℃（5  ℃/min），并在 90  ℃保温
                                                               测试前，用双面胶带将复合凝胶固定在铜板上，进
            10 min，再以相同的控温速率从 90  ℃降至 25  ℃。
                                                               行喷金处理以确保导电性。
            记录储存模量（G′）、损耗模量（G″）随温度的变化。
                                                               1.3   数据处理
            1.2.5   复合凝胶质构测定
                 参考 WANG 等    [26] 方法，采用物性测试仪两次下                   所有数据重复测定 3 次，以平均值±标准偏差表
                                                               示。用 Statistix 9 软件（美国佛罗里达州塔拉哈西分
            压的模式测定凝胶的质构特性。选用 P/0.5 圆柱型探
                                                               析软件公司）进行统计分析。显著性水平设为 α=
            头进行质构特性实验。测试前，将凝胶从冰箱中取
                                                               0.05；用最小显著性差异法检验数据间的差异显著
            出并在室温下平衡 2 h。探头测试前、中、后的速率
                                                               性，用 p<0.05 表示差异显著。
            分别设置为 1.0、2.0 和 5.0 mm/s；下压距离 7.0 mm，
            触发力 5.0 g。凝胶质地以凝胶的硬度、弹性、黏聚
                                                               2   结果与讨论
            性、胶黏性、咀嚼性和回复性为指标。
            1.2.6   复合凝胶持水性测定                                  2.1   CaCl 2 质量浓度对溶胶粒径和 ζ-电位的影响
                 参考 WANG 等    [27] 方法，取适量（1.0 g）凝胶置                不同质量浓度 CaCl 2 处理对 GSPI/果胶溶胶粒
            于含滤纸的离心管中，室温下 3000 g 离心 20 min，                    径的影响如图 1 所示。
            称取离心后凝胶的质量。持水性（WHC）按下式计算：                              由图 1 可见，未添加 CaCl 2 时 GSPI/DE-38%与
                    WHC / %   (m   1  m 2 ) / (m   1  m 0 ) 100     GSPI/DE-76%的粒径大小分别为 1782.3 和 1891.0 nm。
            式中：m 1 为凝胶、离心管和滤纸的质量，g；m 0 为                       添加 CaCl 2 后，GSPI/果胶溶胶粒径显著下降；质量浓
            离心管与滤纸的质量，g；m 2 为离心后的离心管和                          度 0.22 g/L CaCl 2 处理后，两组样品分别下降到 1082.3
            滤纸的质量，g。                                           和 1199.3 nm。在之前的研究中发现，适量加入果胶可
            1.2.7   复合凝胶蛋白浸出率测定                                有效调节团聚体的粒径分布，使蛋白分布更加均匀                     [23] ，
                 参照 HE 等   [23] 的方法对凝胶浸出性进行评价。                 而 CaCl 2 的添加使得溶胶粒径进一步降低。ZHANG
            室温下，将 2.0 g GSPI/果胶复合凝胶浸没在 10.0 mL                 等 [30] 报道了蛋白的平均粒径随盐离子浓度的升高而
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