Page 140 - 精细化工2019年第12期
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·2468·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                  第 36 卷

                 多糖由 10 个或 10 个以上单糖通过缩合而成，                     实多糖基础研究提供实验数据支持，而且为进一步
            广泛存在于植物、动物、微生物和海洋生物体内，                             筛选高功能成分的黑穗醋栗果实多糖提供了科学依据。
            对生物的代谢、细胞生长等生命活动起着至关重要
                   [1]
            的作用 。研究表明，多糖的生物活性与结构有密                             1    实验部分
            切的联系。通过引入其他基团，不仅可改变多糖的理                            1.1    材料、试剂与仪器
            化性质、增强生物活性，而且可以产生新的活性                     [2-4] ，      成熟的黑穗醋栗果实（黑丰）由黑龙江省牡丹
                      [3]
            如 Du 等人 研究表明，乙酰化银耳多糖产生新的免                          江市农科院提供，用去离子水将果实洗净，–20℃储
                                [4]
            疫调节活性；Lu 等人 发现，硫酸化柿子多糖与非                           存，备用。
            硫酸化多糖相比具有抗病毒活性。目前，常用的化                                 乙酸酐（质量分数≥95%），AR，国药集团化
            学修饰多糖方法有乙酰化、硫酸酯化、羧甲基化和                             学试剂有限公司；D-葡萄糖、D-半乳糖、L-阿拉伯
                   [2]
            硒化等 。其中，乙酰化被认为是一种有效、简单                             糖、D-鼠李糖、D-木糖、D-甘露糖、L-岩藻糖、D-
            和快速修饰多糖结构的方法。许多研究结果证实，                             半乳糖醛酸、α-葡萄糖苷酶（100  U/g），AR，美国
            多糖经过乙酰化修饰后生物活性显著提高。但目前                             Sigma  公司；2,2-联苯基-1-苦基肼基（2,2-Diphenyl-
            关于多糖修饰后结构的探究报道较少。Xie 等人                      [5]   1-picrylhydrazyl, DPPH），上海阿拉丁生化科技股份
            研究表明，乙酰化修饰能够显著提高青钱柳叶片多                             有限公司；氯化硝基四氮唑蓝（NBT）、吩嗪硫酸甲
            糖的抗氧化活性，但是没有改变多糖的单糖（阿拉                             酯（PMS），AR，732 强酸苯乙烯阳离子交换树脂、
            伯糖、半乳糖、葡萄糖、鼠李糖、甘露糖）组成，                             719 阴离子交换树脂、抗坏血酸（V C ）、烟酰胺腺嘌
                                                     [6]
            只是 5 种单糖的物质的量比不同。Chen 等人 证实                        呤二核苷酸（NADH）、对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖
            具有适当的取代度和低相对分子质量的乙酰化灵芝                             苷（pNPG），BR，上海源叶生物科技有限公司；透
            多糖具有较强的抗氧化能力，NMR 分析推断了乙酰                           析袋（截留分子量：3500  Da），北京博奥拓达科技
                                      [7]
            化可能的取代位置。Ren 等人 推断出蛹虫草多糖中                          有限公司；α-淀粉酶（3700 U/g），BR，北京奥博星
            乙酰基可能的取代位置，但是没有确定乙酰化多糖                             生物科技有限公司。
            具体的糖链结构。由此可见，对于乙酰化多糖的结                                 TU-1901 双光束紫外-可见分光光度计，北京普
            构研究目前仍处于初始阶段，这主要归因于多糖结                             析通用仪器有限责任公司；FDU-1100 冷冻干燥机、
            构的复杂性。                                             N-1300 型旋转蒸发仪，东京 EYELA 株式会社；
                 黑穗醋栗（Ribes nigrum L）是一种重要的小浆                  FTS135 型傅里叶变换红外光谱仪，德国 Bruker 公
            果资源，与蓝莓、树莓和沙棘等一起被称为第三代                             司；G-2010 气相色谱仪，日本 Shimadzu 公司；
            新型水果，含有多种活性成分，受到消费者的广泛                             S-3400N 扫描电子显微镜，日本 Hitachi 公司；Spark
            关注  [8-9] 。研究表明，黑穗醋栗果实多糖具有抗氧化、                     10M 酶标仪，瑞士 Tecan 公司。
            抗肿瘤、降血糖、增强免疫力等生物活性                   [10] 。目前，     1.2    方法
            国内外研究者对黑穗醋栗果实多糖的研究主要集中                             1.2.1   黑穗醋栗果实多糖的制备
            在不同相对分子质量多糖抗肿瘤活性以及体内和体                                 参考 Takata 等人     [12] 的方法，稍作修改。将
            外抗氧化功效，对于不同相对分子质量黑穗醋栗果                             100.0 g 果实经食品加工机粉碎得到的黑穗醋栗果浆
            实多糖的结构及多糖改性并没有深入研究                    [11-12] 。本   置于烧杯中，按液料比 4∶1（mL/g）加入去离子水，
            课题组近年来采用不同方法制备了不同相对分子质                             混匀，用 NaOH 溶液（1.0 mol/L）调至中性，室温
            量的多糖及硫酸酯化多糖，初步探究了多糖的结构，                            下电动搅拌浸提 1  h。提取液离心（9000  r/min）
            包括单糖残基组成、外貌形状、是否具有三螺旋结                             10 min，将上清液在流速 1.0 mL/min 下，依次过 732
            构等。但是由于黑穗醋栗果实多糖结构的复杂性，                             阳离子交换树脂（2.0  cm×40  cm）和 719 阴离子交
            对其糖链的精细结构尚未确定。另外，本课题组证                             换树脂（2.0 cm×40 cm），去离子水为洗脱剂。收集
            实硫酸酯化、超声法降解、化学法降解等修饰可以                             洗脱液，旋蒸浓缩（ 50  ℃）、去离子水透析
            显著改善黑穗醋栗果实多糖的抗氧化、降血糖等生                             （3500 Da，72 h）。然后，将透析液旋蒸浓缩，体
            物活性    [9,13-15] 。                                 积分数 80%的乙醇醇沉、冷冻干燥（–80  ℃），得
                 目前，对黑穗醋栗果实中多糖乙酰化修饰的研                          黑穗醋栗果实多糖（BP）。经紫外扫描和化学法                     [10]
            究鲜见报道。因此，本文制备不同取代度的黑穗醋                             测定，BP 不含蛋白、花色苷、多酚和还原糖。根
            栗果实乙酰化多糖，并初步研究了乙酰化修饰对多                             据 Xu 等人的方法测定多糖得率与质量分数                  [15] ，BP
            糖结构特性和活性的影响。不仅为丰富黑穗醋栗果                             得率与质量分数分别为7.12%±0.26%和44.2%± 0.23%。
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