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·244·                             精细化工   FINE CHEMICALS                                  第 36 卷

            类药物开发的重要途径之一             [6-9] 。磷酸酯化是对糖类           1.24 g 灰白色粗多糖。粗多糖用 50  mL 去离子水复
            分子进行结构修饰的重要方法，一些不具有生物活                             溶后，在截留分子量为 3.5  kDa 的透析袋中用流动
            性或活性较弱的多糖经磷酸酯化后其活性得到明显                             的自来水透析 48 h，去离子水透析 24 h；透析液上
            改善，尤其是增强了其抗肿瘤              [10] 、抗辐射  [11-12] 、抗   DEAE-ecllulose 柱（Φ30 mm×300 mm）纯化，收集
            氧化性    [13] 等活性。                                   富集成分浓缩至 25 mL，再用 Sephadex G-200 凝胶
                 款冬花是菊科植物款冬（Tussilago farfara L.）              柱（Φ15 mm×300 mm）纯化，共分得 3 个组分，选
            的干燥花蕾，临床上用于治疗慢性支气管炎（气管                             择其中洗脱峰面积最大的组分，浓缩冻干后得到白
            炎）、咳嗽气喘等疾病，主要分布于陕西、宁夏、河                            色粉末状款冬花多糖。经高效凝胶液相色谱检测为
            北、甘肃等地       [14-17] 。款冬花多糖是款冬花中重要的                均一多糖，糖含量是 99.2%；相对分子质量为 5.5 kDa；
            活性成分之一，有研究报道其具有一定的抑制白血                             该多糖为甘露糖和葡萄糖两种单糖组成，甘露糖与
            病 K562 细胞和抗氧化活性，但活性相对较弱                  [18-19] 。  葡萄糖物质的量比为 1.798∶1。
            目前对款冬花多糖化学修饰改性的研究较少。                               1.2.2    款冬花磷酸酯多糖的制备
                 鉴于此，本文以陕西道地药材款冬花中的多糖                              参照文献[21]方法，并稍作修改。先精确称取
            成分为原料，采用混合磷酸盐法，合成得到了款冬                             0.1 g 款冬花多糖样品，加入 5  mL 去离子水溶解，
            花磷酸酯多糖，并采用响应面法优化其合成工艺，                             常温下将制备的款冬花多糖水溶液、磷酸盐（磷酸
            同时初步探讨了其抗氧化活性。旨在为款冬花多糖                             二氢钠和磷酸氢二钠按一定质量比混合）与适量催
            及其衍生物进一步开发成新的药品提供一定的理论                             化剂尿素混合均匀。将混合物在水浴中加热一定时
            依据。                                                间后取出，将反应液装入截留分子量为 3.5  kDa 的
                                                               透析袋中用流动的自来水透析 48  h。透析液浓缩经
            1    实验部分                                          冷冻干燥后即得浅褐色粉末状款冬花磷酸酯多糖,
                                                               其得率为 31.53%。
            1.1    材料与试剂
                                                               1.2.3    款冬花多糖磷酸酯化取代度的测定
                 款冬花购自西安市万寿路中药材批发市场，经
                                                                   参照文献[21]，测定磷酸酯化款冬花多糖的取
            陕西中医药大学王国全博士鉴定为菊科植物款冬
                                                               代度。精确称取磷酸二氢钾 0.5000  g，用蒸馏水溶
            （Tussilago farfara L.）的干燥花蕾。
                                                               解后稀释定容于至 100 mL 容量瓶中，振荡使其混合
                 磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、尿素、
                                                               均匀， 配成 5 g/L 的标准磷溶液。精密吸取该溶液 0、
            钼酸铵、抗坏血酸，AR，天津科密欧化学试剂有限
                                                               1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0  mL，分别
            公司；1,1-二苯基-2-苦肼基，BR，日本东京仁成工                        移入 9 个 50 mL 容量瓶中，依次分别加入 10 mL 质
            业株式会社；LS-206 大孔吸附树脂（弱极性，粒径                         量分数为 26%的硫酸溶液、5  mL 质量分数 2%的钼
            0.3~1.25 mm），西安蓝深特种树脂有限公司。                         酸铵溶液、2  mL 质量分数为 5%的抗坏血酸溶液，
                 OSB-2100 型旋转蒸发仪、DZ5-WS 型低速台式                  振荡使其混合均匀，沸水浴加热 10 min，立即用冷
            离心机、HB-Ⅲ型循环水式真空泵，上海爱朗仪器                            水迅速冷却，并定容至 50 mL。在波长 820 nm 处测
            有限公司；GZX-DH.500BS 型电热恒温干燥箱，上                       定磷酸二氢钾溶液的吸光度 A，根据所得不同浓度
            海跃进医疗器械有限公司；ALPHA1-4 型真空冷冻                         溶液的吸光度值绘制标准曲线，所得回归方程是：
            干燥机，德国 Christ 公司；722N 型可见分光光度计，                           y = 0.0215x  0. 0322，R =0.9997   （1）
                                                                                            2
            上海鼎科科学仪器有限公司；BSA224S 型分析天平，                        其中，y 表示吸光度值 A，x 表示标准品磷酸二氢钾
            赛多利斯科学仪器（北京）有限公司。                                  的质量浓度，g/L。
            1.2    实验方法                                            根据磷的标准曲线测得样品中总磷质量分数和
            1.2.1    款冬花多糖的制备                                  游离磷质量分数。结合磷质量分数按式（2）计算：
                 按照文献[20]方法，将在干燥箱中 80  ℃下干燥                      结合磷质量分数 = 总磷质量分数  游离磷质量分数 （2）
            后的 100 g 款冬花脱脂后粉碎成 60 目颗粒。在 21 mL                      取代度 DS 按式（3）计算：
            水中加入 1 g 款冬花颗粒，在 84  ℃下提取 3 次，提                       DS=(磷含量/31)/[(100  3.32×磷含量)/162]=
            取液过滤后按 1 g 款冬花颗粒浓缩成 1mL 溶液，浓                             (5.23×磷含量)/(100  3.32×磷含量)        （3）
            缩液采用木瓜蛋白酶结合 Sevage 法            [20] 脱蛋白后，再        其中：162 为款冬花多糖分子中单糖的摩尔质量，
            用 LS-206 大孔吸附树脂进行脱色处理，脱色液按 1 g                     g/mol；31 为磷的摩尔质量，g/mol；3.32 为游离磷
            款冬花颗粒浓缩成 1 mL 溶液，浓缩后用 4 倍体积的                       换算成结合磷酯基团的系数；磷含量为结合磷质量
            无水乙醇醇沉离心后，20  ℃下冻干 24  h，即得                       分数，%。
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