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·248· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 36 卷

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从图 6 可以看出，反应温度所对应的曲面最为 1664 cm 处的 C==O 吸收峰、1200~1400 cm 出现
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陡峭，反应时间所对应的曲面相对最为平滑，这说 的一组 C—H 吸收峰、1000~1200 cm 出现的 C—O
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明反应温度对款冬花磷酸酯多糖取代度的影响最显 吸收峰以及 907 cm 呋喃环吸收峰并没有发生明显
著，反应时间的影响最小。根据 Box-Behnken 实验 变化，这说明修饰对于多糖本身结构的影响不大，
拟合得到的回归方程进行一阶偏导，可得到：A= 基本保持了多糖的原有性质；修饰后的多糖也出现
0.03，B=0.58，C=0.15；根据回归模型预测的款冬 了一些新的变化，其中 OH 峰的吸收值变小，且分
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花磷酸酯多糖合成的最优反应条件是：反应时间 裂成 3447 和 3526 cm 两个吸收峰，说明多糖中部
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6.03 h，反应温度 85.80 ℃，尿素用量为反应物总质 分—OH 参与了磷酸酯化反应；1337~1268 cm 处是
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量的 14.25%，磷酸二氢钠与磷酸氢二钠质量比为 P==O 伸缩振动峰，1020 cm 处是 P—O—C 伸缩振
2∶1，混合磷酸盐与款冬花多糖质量比为 1.5∶1， 动峰；此图的特征峰同已有磷酸酯多糖谱图相比，
此时得到的款冬花磷酸酯多糖中取代度的预测值是 基本相符合 [11,13] ，说明得到的产品确定为款冬花磷
0.693。按照实际的可操作性，将上述预测反应条件 酸酯多糖。
加以微调，即：反应时间 6.0 h，反应温度 86 ℃， 2.4 款冬花磷酸酯多糖的抗氧化活性
尿素质量分数 14.25%，磷酸二氢钠与磷酸氢二钠质 2.4.1 清除 DPPH•实验
量比为 2∶1，混合磷酸盐与款冬花多糖质量比为 DPPH•是一种稳定的自由基，当加入自由基清
1.5∶1。按此工艺条件，分别取款冬花多糖 0.1 g 进 除剂后，DPPH•的单电子就会配对，使其溶液颜色
行 3 次平行磷酸酯化反应，所得的款冬花磷酸酯多 由紫色变浅，因此可用于评价自由基清除剂清除自
糖的取代度分别是 0.695、0.698、0.699，平均取代 由基的能力，以抗坏血酸 V C 做参照试剂进行清除
度为 0.697，所得结果与预测值十分接近，说明响应 DPPH•的测试，结果如图 8 所示。
面预测所得模型的正确性。
2.3 款冬花磷酸酯多糖的表征
为确认是否得到目标产物，本研究选择款冬花
多糖（TFP）和款冬花磷酸酯多糖（TFPP）进行红
外光谱测定，结果如图 7 所示。

图 8 不同质量浓度的样品对清除 DPPH•的影响
Fig. 8 Effect of mass concentration of sample on the
scavenging rate to DPPH•

从图 8 可以看出，款冬花多糖和款冬花磷酸酯

多糖均有一定的清除 DPPH•能力，随着多糖浓度的
图 7 样品的红外光谱图 增加，清除能力逐渐增大。相比较而言，款冬花磷
Fig. 7 FTIR spectra of samples
酸酯多糖的清除能力较好，当质量浓度为 6 g/L 时，
由图 7 可看出，未经修饰的款冬花多糖，在 其清除率最高为 98.91%，几乎与对照品（V C 的清除
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3386 cm 出现了一个宽峰，这是—OH 的伸缩振动， 能力相当。这说明用磷酸酯化的方法来修饰款冬花
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说明多糖存在分子间与分子内氢键；2928 cm 是多 多糖改善了其抗氧化活性。
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糖分子中 C—H 键伸缩振动峰；1655 cm 处是 C==O 2.4.2 清除超氧阴离子实验
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所引起的非对称伸缩振动峰；在 1200~1400 cm 出 超氧阴离子（O 2 •）的毒性是机体发生氧中毒的
现的一组吸收峰是 C—H 引起的变角振动；在 1000~ 主要原因，它能够造成膜损伤、线粒体氧化磷酸化
1200 cm –1 出现的吸收峰是 C—O 伸缩振动所引起 作用的改变及其他一系列的变化。通过邻苯三酚在
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的；907 cm 出现的较大的吸收峰是由呋喃环的对 碱性条件下自氧化生成带色的中间产物 O 2 •，当释
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称伸缩振动所引起的，848 cm 出现的小峰是次甲 放出的 O 2 •受到抑制或清除时，就可以阻止中间产
基的横向振动引起的；经过磷酸酯化的款冬花多糖， 物的积累。因此，通过测定样品对邻苯三酚自氧化
与修饰前比较，2927 cm –1 处的 C—H 键吸收峰、 抑制作用，即可表征其对超氧阴离子清除作用。以