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·584· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 36 卷

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1
DCFH 水溶液，在 20 mW/cm 的自 然光下照射 样品进行了红外光谱表征（图 1a）。3378 cm 处吸收
2 min，立即使用酶标仪检测每孔荧光强度（激发波 峰对应于羟基（—OH）的伸缩振动，这是因为在碱性
长为 488 nm、检测波长为 520 nm）以评估 C 60 -OH- 反应条件下羟基通过亲核加成反应键合至 C 60 碳笼
1
GSH 在光照下产生 ROS 的效率。 上；3232、2922 和 1677 cm 处的吸收峰分别对应于
1.2.4 细胞实验 GSH 中—NH 伸缩振动、—CH 2 伸缩振动和—C==O
1.2.4.1 暗毒性测试 伸缩振动，证明 GSH 被键合至 C 60 上。1114 cm 1
成人表皮角质细胞（HEK-A）和人小神经胶质 处的 C—N 伸缩振动峰，部分来源于 GSH，另一部
细胞（HM）分别以 10000 个/孔接种于 96 孔板中， 分来源于 GSH 与 C 60 生成的新 C—N 键；1619 和
1
培养 24 h 后加入梯度浓度（5、10、20、50 mol/L） 1392 cm 分别为 C 60 中为 C==C 和 C—C 的伸缩振
的样品溶液与细胞孵育 24 h 后，将培养基更换为 动峰。红外光谱可以证明，GSH 通过氨基与富勒烯
10 L CCK-8 和 90 L 无色 DMEM 并孵育 1 h，使 的亲电加成反应被修饰至碳笼表面，同时多个羟基
用酶联免疫检测仪在 450 nm 波长处测定其光吸收 也被键合至富勒烯上。紫外-可见吸收光谱能够反映
值，根据以下公式计算细胞活性： 富勒烯的共轭结构，水溶性富勒烯溶液呈现出黄褐
(  )实验组吸光度 空白组吸光度 色，在紫外区 250 nm 左右处有特征吸收峰 （图 1b），
细胞活性 /%   100
(  )对照组吸光度 空白组吸光度 证明水溶性的 C 60 -OH-GSH 保持着较为完整的碳笼
1.2.4.2 光动力测试 共轭结构 [13] ，有利于受光激发诱导产生活性氧类。
人非小细胞肺癌细胞（A549）、人恶性胶质母
细胞瘤细胞（U87-MG）、人前列腺癌细胞（DU145）
和人肝癌细胞（HepG2）分别接种到 96 孔板中孵育
20 h, 加入梯度浓度（1、2.5、5、10、20 µmol/L）
的样品溶液与细胞孵育 3 h，将培养基更换为无色
2
DMEM 后在 20 mW/cm 的光强下照射 10 min，更
换为新鲜培养基后孵育 24 h，再进行细胞活性测定。
1.2.4.3 细胞内的 ROS 生成检测
A549、U87-MG、DU145 和 HepG2 细胞分别以
50000 个/皿的密度接种到共聚焦皿中培养 20 h，与
10 mol/L 样品溶液共孵育 3 h 后使用 PBS 清洗 2 次，
加入含 10 mol/L H2DCFDA 的无色 DMEM 孵育
20 min，再用 PBS 清洗 3 次以除去过量的 H2DCFDA，
将培养基更换为 1 mL 无色 DMEM 后在 20 mW/cm 2
的光强下照射 10 min，加入 Hoechst33342 染色 5 min
后立即使用共聚焦显微镜观察（激发波长：488 nm，
检测波长：500~545 nm）。
1.2.4.4 凋亡细胞成像
A549、U87-MG、DU145 和 HepG2 细胞分别接
种到共聚焦皿中培养 20 h，将其分为对照组、黑暗组
和光照组。对照组与培养基孵育；黑暗组与 10 µmol/L
样品溶液共孵育 3 h 后，更换为新鲜培养基继续培
养 24 h；光照组与 10 µmol/L 样品溶液共孵育 3 h
2
后，在 20 mW/cm 的光强下照射 10 min，更换为新
鲜培养基继续培养 24 h。使用 4 µmol/L 的 PI 对 3
组细胞染色 5 min，通过共聚焦显微镜观察（激发波
长：559 nm，检测波长：570~670 nm）。

2 结果与讨论
图 1 C 60 -OH-GSH 的傅里叶变换红外光谱（a）、紫外-
可见吸收光谱（b）和水合粒径分布图（c）
2.1 C 60 -OH-GSH 的结构与性质
Fig. 1 FTIR spectrum (a), UV-Vis absorption spectrum (b),
为了确定水溶性富勒烯衍生物的化学组成，对 hydrodynamic size (c)of C 60 -OH-GSH