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第 4 期                     张孝焱，等:  谷胱甘肽-富勒烯光敏剂的合成及光动力学                                    ·583·


            激发成较长寿命的三线态，从而诱导产生大量的                              1.2   合成与表征
            ROS，是一类高效的光敏剂。相比传统的光敏剂,  富                         1.2.1    C 60 纯度测定
            勒烯具有更稳定的分子结构，不易发生光降解和光                                 用 HPLC 和 MALDI-TOF 检测了 C 60 的纯度，
                 [5]
            漂白 。为了改善富勒烯的水溶性并将其用于生物                             测定条件：Buckyprep 柱（250 mm 4.6 mm 5 µm）、
            领域，需要使用亲水基团对富勒烯碳笼进行表面修                             甲苯为流动相、流速 1 mL/min、检测波长 310 nm；质
                           [6]
            饰。自从 Chiang 等首次报道了水溶性富勒烯以来，                        谱表征以蒽三酚作为基质并在正离子模式下进行。
            已发展出了多种水溶性富勒烯衍生物，其具有较大                             1.2.2    C 60 -OH-GSH 合成
            的离域共轭结构和优异的生物相容性，作为光敏剂                                 C 60 -OH-GSH 合成路线如下所示：
            被广泛应用于光动力治疗研究               [7-10] 。设计能够高效
            光诱导产生活性氧并具有优异生物安全性的富勒烯
            光敏剂，是将其应用于临床光动力治疗的关键。
                 还原型谷胱甘肽（GSH）作为一种内源性活性
            物质，因具有极好的水溶性和增强机体免疫等多种
            生理活性     [11-12] 在本文中被用来修饰 C 60 分子，并且

            得到一种水溶性纳米颗粒（C 60 -OH-GSH）。对 C 60 -
            OH-GSH 进行结构组成表征和性质测试，结果证明                              称取 C 60 (50 mg, 0.07 mmol)溶解于 35 mL 甲苯，
            其具有优异的水溶性和生物相容性，在体外和细胞                             另取 GSH  (100  mg,0.325  mmol)和 NaOH  (800  mg,
            水平均表现出显著的光动力效果，有望作为一类高                             20 mmol)溶于 3  mL 去离子水中，再加入 20  mL 乙
            效光敏剂应用于临床光动力治疗中。                                   醇得到均相溶液。在室温和氮气保护下，将上述溶
                                                               液缓慢滴加到 C 60 的甲苯溶液中，搅拌反应 48 h 后，
            1   实验部分                                           70 ℃旋蒸除去甲苯和乙醇和水，得到固体，再使用

                                                               超纯水将样品溶解后离心取上清液，220 nm 水系滤
            1.1   试剂与仪器
                                                               膜过滤，进行透析纯化（透析袋截留分子量 3500D），
                 C 60 ，HPLC 纯度 99.5%，厦门福纳新材料有限
                                                               然后经冷冻干燥得到固体产物。
            公司；甲苯、氢氧化钠、乙醇，分析纯，国药集团
                                                               1.2.3    C 60 -OH-GSH 的结构与性能测定
            化学试剂有限公司；还原性谷胱甘肽（质量分数
                                                                   通过元素分析仪对 C 60-OH-GSH 固体中 C、N 元
            98% ），阿 拉丁试剂 有限公司 ；细胞培 养基
                                                               素含量进行检测，根据 C 和 N 的含量可以计算出 C 60-
            （Dullbecco’s modified Eagle’s medium，DMEM），
                                                               OH-GSH 的平均相对分子质量；准确称量 C 60 -OH-
            Invitrogen 公司；胎牛血清（Fetal  bovine  serum,
                                                               GSH 固体将其溶于超纯水配制成 500 µmol/L 的水溶
            FBS）、青霉素（100 mg/L）、链霉素（100 mg/L），
                                                               液；取 500 µmol/L 的样品水溶液滴于金镜表面，待
            Gibco 公司；Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂盒,
            东仁化学科技有限公司；2-（3,6-二乙酰氧基-2,7-二                      水蒸发完全后，采用全反射模式对固体进行红外光
            氯-9H-氧杂蒽- 9-基）苯甲酸（H2DCFDA）（质量分                     谱图采集；以超纯水作为基线背景，在 600 nm/min
            数 97%），伊诺凯公司；磷酸盐缓冲溶液（PBS）、                         的扫描速度下测试 50 µmol/L 的 C 60-OH-GSH 水溶液
            Hoechst33342 和碘化丙啶（PI），北京索莱宝科技有                    在 200~800 nm 内的紫外-可见吸收光谱；将 500 µmol/L
            限公司。                                               的样品溶液分别装入测试池内，使用粒度仪测定其
                 LC2030 型高效液相色谱仪（HPLC）、BIOTECH                 水合粒径和 Zeta 电势。
            AXIMA 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪                                C 60 -OH-GSH 在生理溶液中的稳定性测试是将
            （MALDI-TOF），日本岛津公司；9100 高效液相色                      100 L 的 500 µmol/L 的样品溶液分别加入 900 L 的
            谱仪，日本分析株式会社；Millipore Milli-Q 超纯水                  生理盐水、PBS (0.01 mol/L，pH=7.4)、无色 DMEM（葡
            制备仪，美国 Merck 公司；NanoZS  ZEN3600 粒度                 萄糖质量浓度为 4.5 g/L）和 FBS 中，在 6000 r/min
            仪，英国 Malvern 公司；FD-1A-50 冷冻干燥器，北                   转速下离心 10 min 后观察是否有沉淀析出。
            京博医康实验仪器有限公司；Nicolet IN10 MX 红外                        取 100 µL 新配制的 10 mmol/L 的 H2DCFHDA
            光谱仪，美国 Thermo 公司；UV-4802H 紫外-可见吸                   乙醇溶液，加入 0.5 mL 10 mmol/L 的氢氧化钠溶液，
            收光谱仪，日本日立公司；Flash EA 1112 元素分析仪，                   室温避光静置 0.5 h,  加入 0.5 mL 0.02 mol/L PBS 溶
            意大利 Thermo Finnigan 公司；Infinite M1000Pro 酶联        液，混合均匀制得 DCFH 水溶液。在 Costar 黑色 96
            免疫检测仪，奥地利 Tecan 公司；FV  1000-IX81 共                 孔板的每孔加入 20 µL 梯度浓度的样品溶液（1、2.5、
            聚焦荧光显微镜，日本 Olympus 公司。                             5、10、20、40 µmol/L，对照组加入超纯水）和 180 L
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