Page 107 - 精细化工2019年第9期

第 9 期 李维新，等: 超微粉碎-微波双水相萃取红花龙胆中环烯醚萜苷类 ·1835·

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24380.24377X+10456.84937，R =0.9998，在 0.002~ 0.56%、0.49%，表明提取液在 16 h 内比较稳定。
0.40 g/L 内线性关系良好。确定獐牙菜苦苷回归方程 HPLC 实验中，取提取液，从制备完毕开始放
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为 Y=28336.2468X+8312.6229 ， R =0.9988 ，在 置，分别于 0、2、4、8、16 h 进样检测，龙胆苦苷
0.0055~0.11 g/L 内线性关系良好。 和獐牙菜苦苷峰面积积分值 RSD 分别为 1.63%、
1.6 红花龙胆全草中环烯醚萜苷类的得率计算 1.47%，表明提取液在 16 h 内比较稳定。
在具塞 PP 离心管中精确加入 3.0 g K 2 HPO 4 和 1.6.4 加样回收率实验
19.2 g 去离子水，充分溶解后，加入 7.8 g 无水乙醇， 紫外吸收实验中，精密称取已知环烯醚萜苷类
使得双水相体系总质量为 30.0 g。静置待溶液分相， 含量的提取液 1 mL，共 6 份，加入 1 mL 的龙胆苦
记录上下相体积。称取 3.5 g 红花龙胆干粉加入到该双 苷和獐牙菜苦苷对照品，按 1.6 节方法测定提取液
水相体系中，在微波作用下控制温度为（70±1）℃， 吸光度，计算龙胆苦苷和獐牙菜苦苷的平均回收率
提取 110 s；浸泡 2 h 后离心处理（4500 r/min， 分别为 99.6%、101.7%，RSD 分别为 0.76%、0.53%，
10 min），将上下层溶液全部移出置于有刻度的试管 表明该方法准确度较好。
内，取上清液减压浓缩，挥干溶剂，残渣用甲醇溶 HPLC 实验中，精密称取已知环烯醚萜苷类含
解并定容至 50 mL 容量瓶中，将制得的提取液稀释 量的提取液 1 mL，共 6 份，加入 1 mL 的龙胆苦苷
20 倍。因为紫外测定更加迅速，将单因素实验提取 和獐牙菜苦苷对照品，按 1.6 节方法操作，计算龙
液进行紫外吸光度测定；HPLC 更加准确，所以验 胆苦苷和獐牙菜苦苷的平均回收率分别为 98.8%、
证和比较实验采用 HPLC 测定。代入龙胆苦苷和獐 101.9%，RSD 分别为 1.52%、1.66%，表明该方法
牙菜苦苷回归方程即得环烯醚萜苷类质量浓度，按下 准确度较好。
式计算红花龙胆全草中总环烯醚萜苷类得率。 1.7 最佳工艺的验证和比较实验
环烯醚萜苷类得率/%=ρ×n×V/m×100 （1） 为了进一步考察优化工艺的可靠性和稳定性，
总得率/%=y 1 +y 2 （2） 准确称取 3.5 g 红花龙胆干粉，在确定的工艺条件下
式中：ρ为环烯醚萜苷类质量浓度，g/L；n 为稀释 进行 3 次平行实验。微波法和乙醇热回流法提取参
考程玉鹏等 [14] 的方法，因为 HPLC 方法准确性更好，
倍数；V 为提取液体积，L；m 为原料干重，g；y 1
为龙胆苦苷得率，%；y 2 为獐牙菜苦苷得率，%。 所得数据更严谨，所以采用 HPLC 定量分析对超微
1.6.1 精密度实验 粉碎-微波双水相萃取、微波法、乙醇热回流法进行
紫外吸收实验中，分别精密吸取 6 份龙胆苦苷 比较。
和獐牙菜苦苷对照液各 1 mL，在 270 和 235 nm 分 1.8 红花龙胆全草中总环烯醚萜苷类抗氧化活性
别测吸光度，吸光度相对标准偏差（RSD）分别为 的测定
0.35%、0.24%，表明仪器精密度较好。 1.8.1 总抗氧化能力的测定
HPLC 实验中，分别精密吸取龙胆苦苷和獐牙 参照 Benzie 等 [15] 建立的方法并作修改，扩大溶
菜苦苷对照品各 20 μL，连续进样 6 次，测得保留 液 FeCl 3 用量使其过量，对标准溶液（FeSO 4 溶液）
3+
时间精密度 RSD 分别为 0.71%、0.52%，峰面积 RSD 进行测试并绘制标准曲线。Fe 可被待测液还原为
分别为 1.87%、1.44%，表明仪器精密度良好。 蓝色物质，检测蓝色物质的量即为 FeSO 4 的量，以
1.6.2 重复性实验 FeSO 4 浓度为总抗氧化能力（FRAP）值。将 FeCl 3
紫外吸收实验中，精密称取红花龙胆全草粉末 溶液加入比色管在 270 nm 处读取吸光值 A 1 ，再加
3 g，共 6 份，按照 1.6 节的方法制备提取液，量取 入提取物溶液，于 270 nm 读取吸光值 A 2 ，由 A 1 与
1 mL，共 6 份，在 270 和 235 nm 下分别测吸光度， A 2 的差值，利用标准曲线得到蓝色物质 FeSO 4 的浓
吸光度 RSD 分别为 0.28%、0.26%，表明该方法具 度即 FRAP。以 FeCl 3 溶液为空白对照，以 BHT 和
有重复性。 V C 作为阳性对照，每组平行测定 3 次。
HPLC 实验中，精密称取红花龙胆全草粉末 3 g， 1.8.2 DPPH·清除活性测定
共 6 份，按照 1.6 节的方法制备提取液，进样 20 μL， 参照刘丽华 [16] 建立的方法。以无水乙醇作为空
测得龙胆苦苷含量 RSD 为 1.38%，獐牙菜苦苷含量 白对照，以 BHT 和 V C 作为阳性对照，每组平行测
的 RSD 为 0.95%，表明该方法具有重复性。
定 3 次。DPPH·清除能力计算公式如下：
1.6.3 稳定性实验
DPPH·清除能力/%＝
紫外吸收实验中，取提取液，从制备完毕开始
〔1－(A i －A j )/A 0 〕×100 （3）
放置，分别于 0、2、4、8、16 h 量取 1 mL 检测吸
光度，龙胆苦苷和獐牙菜苦苷吸光度 RSD 分别为 式中：A i 为 DPPH·和样品混合的吸光度；A j 为样品