Page 106 - 精细化工2019年第9期
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·1834·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                  第 36 卷

                 红花龙胆（Gentiana rhodantha Franch.）为龙胆               LC-20AT 高效液相色谱仪，日本 Shimadzu 公
            科龙胆属多年生草本植物，地方俗名小龙胆草、九                             司；XO-5200DT 超声波清洗机，南京先欧仪器制造
            月花和土白莲等。该植物全草入药，能清热除湿、                             有限公司；D8023CTL-K4 微波炉，佛山市顺德区格
            消炎、解毒、止咳，可用于湿热黄疸，小便不利，                             兰仕微波炉电器有限公司；YB-1250A 型粉碎机，
                                                     [3]
            肺热咳嗽     [1-2] 。近年来，环烯醚萜苷类化合物 作为                   浙江永康市速锋工贸有限公司；XDW-6J 型振动式
            龙胆科植物主要药用成分和苦味成分                  [4-5] ，在红花龙      细胞级超微粉碎机，济南达微机械有限公司。
            胆中分离得到 20 余种。                                      1.2    对照品溶液的制备
                         [6]
                 楼之岑等 实验表明，红花龙胆中环烯醚萜苷                              分别精密称取龙胆苦苷和獐牙菜苦苷对照品 10
            类含量甚微，不经富集一般检测不到。双水相萃取                             和 5.5  mg，加甲醇定容至 25 和 10  mL 容量瓶中，
            技术（ATPS）作为一种新型分离技术，具有易于放                           得到 0.4 g/L 的龙胆苦苷和 0.55 g/L 的獐牙菜苦苷对
            大 、可连续 操作、绿 色环保等 优点                  [7]  。自 从     照品储备液，保存，备用。
                      [8]
            Albertssonp 首次采用 ATPS  技术实现叶绿素的分                   1.3    红花龙胆全草干粉的制备
            离后，ATPS 技术在生物碱、萜类等天然产物的分离                              将红花龙胆全草置于 60  ℃恒温干燥箱中烘
            纯化中应用广泛        [9-10] 。超微粉碎技术是近几十年来                干，分别用振动式细胞级超微粉碎机和普通高速多
            迅速发展起来的一项高新技术，主要是利用机械设                             功能粉碎机通过控制粉碎时间（普通 1~3 min，超微
            备对物料进行研磨和撞击，克服物料内部凝聚力，                             5~15 min）和粉碎次数（1~3 次）得到不同粒度的干
            将其粉碎至微米级。与普通粉碎相比具有细胞破壁                             粉，通过 80~200 目筛得到不同粒度普通粉碎干粉，
            率高、粉体粒径细、粒径分布均匀、粉碎温度低与                             300~500 目筛得到不同粒度超微粉碎干粉，于阴凉
            全密闭作业、活性成分破坏小等优点                  [11] 。微波是一       与干燥避光处保存备用。
            种非离子的电磁辐射，被辐射物质的极性分子在微                             1.4    紫外标准曲线的绘制
            波电磁场中快速转向及定向排列，从而产生撕裂和                                 因红花龙胆中环烯醚萜苷类主要是龙胆苦苷和
            相互摩擦引起发热，使能量快速传递和充分利用，                             獐牙菜苦苷，所以量取龙胆苦苷和獐牙菜苦苷标准
            从而加速细胞内有效成分的快速溶出                  [12] 。目前没有       品溶液各 5 mL，在 200~800 nm 内进行紫外扫描确
            对红花龙胆全草进行超微粉碎处理的报道。                                定龙胆苦苷和獐牙菜苦苷的最大紫外吸收波长为
                 由于环烯醚萜苷类对酸很敏感，其苷键极易被                          270 和 235 nm，采用逐级稀释法将对照品储备液稀
            酸、酶水解，发生聚合反应，产生颜色变化或沉淀                             释，制得质量浓度为 0.002、0.004、0.01、0.02、0.04、
            [13]
               。本文采用双水相法利用微波控温〔（70±1）℃〕                        0.10、0.40 g/L 龙胆苦苷和 0.0055、0.011、0.0275、
            和 K 2 HPO 4 液的弱碱性中和植酸改变 pH 来抑制内源                   0.055、0.08、0.11 g /L 獐芽菜苦苷的对照品溶液。
            性水解酶活性，从而降低溶出环烯醚萜苷类发生聚                             在 270 和 235 nm 下分别测定其吸光度。以龙胆苦苷
            合反应的几率。通过单因素和正交实验，筛选出最                             和獐牙菜苦苷标准品质量浓度（g/L）为横坐标，吸
            佳提取工艺，并进行了抗氧化研究，以期能解决传                             光度为纵坐标，绘制标准曲线，所得龙胆苦苷回归
                                                                                       2
            统红花龙胆中环烯醚萜苷提取分离纯化过程中苷键                             方程为 y=0.031x+0.0019，R =0.9994，在 0.002~ 0.40
            易水解、提取率低、生产成本较高等难题，为综合                             g/L 内线性 关系良好。獐牙菜苦苷回归方程为
            开发和利用红花龙胆资源提供了理论参考。                                y=0.0486x+0.0063，R =0.9990，在 0.0055～0.11 g /L
                                                                                 2
                                                               内线性关系良好。
            1    实验部分
                                                               1.5    HPLC 标准曲线的绘制
            1.1    试剂与仪器                                           色谱柱:Boston  Green ODS C 18 柱（4.6  mm×
                 红花龙胆全草（湖南省张家界市区的崇山，由                          250 mm，5 μm）；流动相 V（甲醇）  ∶V（水）=25∶
            吉首大学廖博儒研究员鉴定）；龙胆苦苷对照品（批                            75；流速 1.0 mL/min；色谱峰光谱采集范围 190~700
            号：110770-201716，质量分数 97.6%，中国药品生                   nm；柱温 31  ℃；进样量 20  μL。龙胆苦苷检测波
            物制品检定研究院）；獐牙菜苦苷对照品（批号：                             长为 270 nm，獐牙菜苦苷检测波长为 235 nm；理论
            110785-201404，质量分数 98.3%，中国药品生物制                   塔板数以龙胆苦苷和獐牙菜苦苷计均不低于 3000。
            品检定研究院）；BHT、抗坏血酸（V C ）、硫酸亚铁                            在 1.4 节的质量浓度条件下进行 HPLC 分析，
            （FeSO 4 ）、氯化铁（FeCl 3 ）、DPPH·、无水乙醇、                 以对照品质量浓度（g/L）为横坐标（X），色谱峰面
            K 2 HPO 4 ，化学纯，无锡市展望化工试剂有限公司；                      积为纵坐标（Y），绘制对照品标准曲线，进行线性
            甲醇，色谱纯，天津市康科德有限公司。                                 回归分 析 ，确定 龙 胆苦苷 回 归方程为 Y=
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