Page 81 - 《精细化工》2020年第9期
P. 81
第 9 期 罗 帆，等: 藤茶黄酮绿色制备纳米氧化锌及其抗氧化和抗菌性能 ·1795·
压片机，将样品制成圆形滤片。将 25 mL LB 肉汤固
体培养基（准确称取 0.5 g LB 肉汤粉末与 0.8 g 琼脂
粉并溶于 25 mL 去离子水）放于锥形瓶中，用铝箔
纸封装好瓶口，再将锥形瓶放置在高压蒸气锅中灭
菌 20 min（0.1 MPa，121.5 ℃）。在无菌环境下，
将灭菌好的肉汤固体培养基倒入无菌平板，冷却凝
固。然后，将 100 μL 金色葡萄球菌悬液（无菌环境
中，使用接种环从含有金色葡萄菌的琼脂培养基中
挑取单一菌落，接种至 25 mL LB 液体肉汤培养基
中，密封瓶口，放置在 37 ℃摇床培养 6 h）注入在
培养基上并涂布均匀。取 1 片滤纸片放置于含菌平
板中间，然后将培养基放置在 37 ℃培养箱中培养
12 h，多次实验后用交叉法测得抑菌圈的直径。平
行 3 次实验取平均值。
1.5.2 最小抑菌浓度（MIC）的测定
1.3 结构表征 将不同质量的绿色合成的 Nano ZnO 粉末超声
采用 KBr 压片法，使用傅里叶变换红外光谱仪 分散在 10 mL 无菌水中，得到质量浓度为 0、0.25、
–1
在 600~4000 cm 范围对 ZnO 标样和 Nano ZnO 进 0.50、1.00、1.50、2.50 和 5.00 g/L 的 Nano ZnO 溶
–1
行 FTIR 光谱表征，扫描分辨率为 4 cm ，扫描次数 液。在无菌条件下，向无菌 96 孔板孔中加入 90 μL
为 36 次；在 5°~80°衍射角内，使用 X 射线粉末衍 灭菌好的液体肉汤培养基（称取 0.5 g LB 肉汤粉末
7
射仪对 Nano ZnO 进行 XRD 表征，以 Cu 靶 K α 为辐 溶于 25 mL 去离子水）和 20 μL 1×10 CFU/mL 金色
射源，波长（λ）为 0.154056 nm，管电压 40 kV， 葡萄球菌悬液。轻微摇匀后，分别向每个孔内滴加
管电流 15 mA，扫描速度为 5 (°)/min；将 5 mg 的 90 μL 不同质量浓度的 Nano ZnO 溶液，然后将 96
Nano ZnO 分散在 10 mL 去离子水中，然后将样品溶 孔板封装好并放置在 37 ℃摇床培养 12 h。吸取
液滴在硅片上并干燥，待样品表面喷涂金粒子后， 100 μL 菌悬液均匀涂布于琼脂固体培养基（0.8 g 琼
使用扫描电子显微镜观察样品的形貌和粒度分布。 脂粉溶于 25 mL 去离子水）培养 24 h，检查琼脂培
养基上是否有菌株生长，并以第一个出现单菌落平
1.4 抗氧化活性评价 [22]
采用布兰德-威廉姆斯法 [19] ，通过 DPPH•测定 板的样品浓度为最小抑菌浓度 。平行 3 次实验取
平均值。同样，采用上述方法测定化学合成的 Nano
Nano ZnO 的抗氧化能力。准确称取 3.943 mg DPPH•
ZnO 颗粒的最小抑菌浓度。
粉末并溶于 100 mL 无水乙醇中，得到 1 mmol/L 的
DPPH•溶液。将不同质量的 Nano ZnO 粉末超声分散 2 结果与讨论
在 10 mL 无水乙醇中，得到质量浓度为 0、0.5、1.0、
1.5、2.0 和 2.5 g/L 的 Nano ZnO 溶液。将 2 mL 不同 2.1 FTIR 分析
质量浓度的 Nano ZnO 分别加入到 2 mL DPPH•溶液 图 1 为 ZnO 标样和藤茶黄酮制备的 Nano ZnO
中，混合均匀后黑暗保存 1 h。以无水乙醇调零，在 的 FTIR 谱图。
524 nm 处测得 Nano ZnO 与 DPPH•的混合溶液吸光
度 A i ；同时测定 2 mL 乙醇与 2 mL Nano ZnO 溶液
混合后的吸光度 A j 以及 2 mL 乙醇与 2 mL DPPH•
溶液混合后的吸光度 A 0 。平行 3 次实验取平均值。
DPPH•的清除率（S）计算公式为：
S/% =〔1 – (A i – A j )/A 0 〕×100
1.5 抗菌活性评价
1.5.1 抑菌活性的测定
根据 HU 等 [20] 报道的化学合成 Nano ZnO 的实
验方法，制得尺寸为 30~40 nm 的 Nano ZnO 粉末。
以化学合成的 Nano ZnO 为对照，采用滤纸片法 [21] 图 1 ZnO 标样（a）和 Nano ZnO（b）的红外光谱图
Fig. 1 FTIR spectra of standard ZnO (a) and Nano ZnO (b)
测定本实验绿色合成 Nano ZnO 的抗菌性能。使用 samples
