Page 136 - 《精细化工》2021年第10期

·2066· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 38 卷

按照 1.2.3.1 节方法处理样品，采用紫外-可见分光光 的吸光度；A 0 是水代替样品的吸光度。
度计在 300~400 nm 内进行紫外光谱扫描。 1.3.7.2 清除 ABTS 能力的测定
1.3.2 红外光谱分析 取 7.4 mmol/L 的 ABTS 溶液 5 mL 与 2.6 mmol/L
采用傅里叶变换红外光谱仪用 KBr 压片法测定 的过硫酸钾溶液 5 mL 混合，避光室温放置 12 h 后，
样品的红外光谱。 加蒸馏水稀释 40~50 倍，使其在波长 734 nm 处吸光
1.3.3 热重分析 度为 0.70±0.02。取 2.0 mL 不同浓度的样品溶液，加
应用热分析仪进行热重扫描。升温速率 10 ℃/ 4.0 mL 稀释后的 ABTS 溶液，室温反应 6 min，在
min，升温范围 25~550 ℃，静态空气氛围。 734 nm 处测其吸光度，以抗坏血酸作阳性对照 [15] 。
1.3.4 X 射线衍射分析 ABTS 自由基清除率的计算公式为：
采用 X 射线衍射仪分析硒化前后冬凌草多糖的 A  01 (A  1 i A j1 )
ABTS自由基清除率 /%   100 （2）
结晶性能。Cu K α 辐射，管电压为 40 kV，管电流为 A 01
40 mA，扫描速率为 1.5 (°)/min。 式中：A i1 是样品的吸光度；A j1 是无水乙醇代替 ABTS
1.3.5 单糖组成测定 的吸光度；A 01 是水代替样品的吸光度。
采用 HPLC，选择柱前衍生化法检测冬凌草多糖 1.3.7.3 清除 OH 自由基能力的测定
和冬凌草硒多糖的单糖组成 [11-12] 。分别称取 20.0 mg 取不同浓度样品溶液 2 mL 与 2 mL 9 mmol/L 硫
冬凌草多糖和冬凌草硒多糖样品用 4 mol/L 三氟乙 酸亚铁溶液、2 mL 9 mmol/L 水杨酸-乙醇溶液和
酸（TFA）水溶液在 110 ℃烘箱中水解 4 h。反应结 2 mL 9 mmol/L 过氧化氢溶液混合均匀。将其置于
束后，在水解样品中加入 5 mL 甲醇，旋蒸蒸干，重 37 ℃下反应 1 h，在 510 nm 检测其吸光度，以抗
复 3 次，除掉剩余的三氟乙酸，得到干燥的水解产 坏血酸作阳性对照 [16] 。OH 自由基清除率的计算公
物。在各单糖（葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、 式为：
阿拉伯糖、鼠李糖）以及糖醛酸标准品（葡萄糖醛 A  02 (A  2 i A j2 )
OH自由基清除率 /%   100 （3）
酸、半乳糖醛酸）和水解样品中分别加入 0.5 mol/L A 02
的 NaOH（500 μL）和 0.5 mol/L 的 1-苯基-3-甲基-5- 式中：A i2 是样品的吸光度；A j2 是水代替 H 2 O 2 的吸
吡唑啉酮（PMP）甲醇溶液（500 μL）。将该溶液混 光度；A 02 是水代替样品的吸光度。
合均匀并在 70 ℃下反应 2 h，冷却至室温，调节 pH 1.3.7.4 还原能力的测定
3+
至中性。最后，加入 3 mL 三氯甲烷除去未反应的 铁氰化钾与抗氧化剂反应时，其中的 Fe 被还
2+
2+
PMP，将水相通过 0.22 μm 尼龙膜过滤，并进行 原成 Fe ，Fe 与三氯化铁发生普鲁士蓝反应，在
HPLC 分析。 700 nm 波长处有特征吸收峰。吸光度越大，物质还原
色谱条件：Agilent 1200 色谱系统，DAD-UV 检 力越强 [17] 。取 1.0 mL 不同浓度的样品溶液与 2.5 mL
测器，等梯度洗脱，色谱柱 C18（250 mm×4.6 mm）， 质量分数 1%铁氰化钾溶液、2.5 mL 磷酸盐缓冲液
（pH 6.6，0.2 mol/L）均匀混合，50 ℃水浴 20 min。
流动相：V（0.1 mol/L 磷酸盐缓冲液 pH 6.7）∶V（乙
腈）= 82∶18，流速 1.0 mL/min，检测波长 250 nm， 冷却后加入 2.5 mL 体积分数 10%三氯乙酸溶液以
柱温 35 ℃，进样量 10 μL [13] 。 终止反应。5000 r/min 离心 5 min，取 2.5 mL 上清液，
1.3.6 SEM 依次加入蒸馏水 2.5 mL、质量分数 1%三氯化铁溶
使用扫描电子显微镜对样品形态进行观察，分 液 0.5 mL，室温下反应 10 min 后在 700 nm 测定其
析其形貌特征。 吸光度，以抗坏血酸为对照 [18] 。
1.3.7 体外抗氧化活性测定
2 结果与讨论
1.3.7.1 清除 DPPH 自由基能力的测定
取 2 mL 不同浓度的样品溶液分别添加 2 mL 配 2.1 冬凌草硒多糖理化性质
制好的 0.1 mmol/L DPPH 乙醇溶液，混合均匀后室 冬凌草多糖经硒化修饰得冬凌草硒多糖，收率
温下避光反应 30 min，于 517 nm 处检测其吸光度， 为 62.7%，硒含量为 1.35 mg/g。冬凌草硒多糖呈絮
以抗坏血酸作阳性对照 [14] 。计算 DPPH 自由基清 状，颜色为淡黄色，可溶于水。
除率： 2.2 紫外光谱分析
A  (A  A ) 冬凌草多糖及硒多糖紫外光谱见图 1。由图 1
DPPH自由基清除率 /%  0 i j  100 （1）
A 0 可知，在 300~400 nm 范围内，冬凌草多糖没有观察
式中：A i 是样品的吸光度；A j 是无水乙醇代替 DPPH 到明显的吸收峰；而 Na 2 SeO 3 与冬凌草硒多糖在波