Page 135 - 《精细化工》2021年第10期

第 10 期 程 爽，等: 冬凌草硒多糖的制备及其抗氧化活性分析 ·2065·

凌草中包含冬凌草甲素、冬凌草乙素、皂苷、黄酮 液，将药渣置于 45 ℃烘箱烘干，得到脱脂后的冬
类以及多糖等化学成分。其中，多糖由于其天然抗 凌草粉。称取 5 g 已预处理的冬凌草，加入 150 mL
氧化特性受到越来越多学者的关注 [1-2] 。 蒸馏水，80 ℃浸提 3 h，在此条件下提取 2 次。抽
硒元素是人体内多种酶的重要组成成分，是生 滤，合并滤液，减压浓缩至 15 mL，加入 60 mL 无
命活动必不可少的微量元素，具有营养、解毒、抗 水乙醇，静置 24 h，离心（25 ℃、5000 r/min、5 min），
[3]
氧化、增强免疫等多种生物活性 。自然界中存在 收集沉淀，45 ℃真空干燥，即得冬凌草粗多糖。配
无机硒和有机硒两种形式。无机硒具有蓄积性毒副 制质量分数 10%的冬凌草粗多糖溶液，加入反应液
作用和致突变作用，有机硒生物活性强、毒性低、 总体积 1/10 的质量分数为 30%的过氧化氢，混匀后，
吸收率高，故多选用有机硒来达到补硒目的。其中， 60 ℃水浴反应 2 h。反应结束后，加入反应液总体积
硒多糖兼具硒与多糖双重活性，其生物活性优于多 1/4 的 Sevag 试剂〔V（三氯甲烷）∶V（正丁醇）=
糖和硒，具有抗肿瘤、抗氧化、清除自由基、调节 4∶1〕，充分振荡 20 min，离心（25 ℃、5000 r/min、
免疫功能、降血糖、降血脂等多种生理活性，易被 15 min），收集上清液，重复上述操作 3 次，浓缩、
机体吸收和利用，副作用极小，具有重要的研究意 透析 48 h（截留相对分子质量 8000~10000），透析
[6]
义 [4-5] 。从冬凌草中提取多糖并进行硒化修饰，探索 液在–60 ℃下冻干，得冬凌草多糖 。
其生物学活性，有望推动产业化过程中冬凌草资源 1.2.2 冬凌草硒多糖的制备
价值的充分释放。 按照文献[7-8]方法进行，略有修改。称取 200 mg
因此，为填补冬凌草多糖硒化修饰方向的空白， 冬凌草多糖置于三口烧瓶中，缓慢滴加体积分数为
本文对冬凌草多糖以及硒多糖进行系统研究，为进 0.5%硝酸溶液 20 mL，边加边搅拌。溶解后，加入
一步研究冬凌草多糖及硒多糖作为药物和功能性食 Na 2 SeO 3 200 mg 和催化剂 BaCl 2 100 mg，调节水浴
品提供一定的理论基础。 温度至 70 ℃，恒温反应 6 h。反应结束后，冷却至
室温，用 1 mol/L NaOH 溶液调反应液 pH 至 7~8，
1 实验部分 加入一定量 Na 2 SO 4 除去 Ba ，离心，上清液透析
2+
（截留相对分子质量 8000~10000）至无硒为止（取
1.1 试剂与仪器
少量透析液，用抗坏血酸检测，直到检测液无红色），
冬凌草产自河南济源；浓硫酸（质量分数 98%），
透析液在–60 ℃下冻干，得冬凌草硒多糖。
洛阳昊华化学试剂有限公司；1,1-二苯基-2-三硝基
1.2.3 冬凌草硒多糖硒含量测定
苯肼（DPPH）、2,2′-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺
1.2.3.1 硒标准曲线的绘制
酸）二铵盐（ABTS）、半乳糖（Gal）、甘露糖（Man）、 选用分光光度法测冬凌草硒多糖中硒元素含
木糖（Xyl）、阿拉伯糖（Ara）、鼠李糖（Rha）、葡 量 。测得硒标准曲线方程为 y=0.0213x+0.0114，线
[9]
萄糖醛酸（GlcUA）、半乳糖醛酸（GalUA），AR， 2
性相关系数为 R =0.996，其中： x—硒含量，µg；y
上海麦克林试剂生化科技有限公司；三氯甲烷、正 —吸光度。
丁醇、苯酚、葡萄糖（Glc）、无水乙醇、亚硒酸钠 1.2.3.2 样品硒含量的测定
（Na 2 SeO 3 ）、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、三氯乙酸、 准确称取 20 mg 冬凌草硒多糖于锥形瓶中，加
过氧化氢、三氯化铁、铁氰化钾、水杨酸、硫酸亚 入 3.0 mL 混酸〔V(硝酸，质量分数 68%)∶V(高氯
铁，AR，国药集团化学试剂有限公司。 酸，质量分数 71%)=4∶1〕，盖上表面皿浸泡过夜，
10DX-FTIR 傅里叶变换红外光谱仪，美国 Nicolet 次日加热（190 ℃）消解至消化液呈溶液澄清并伴
公司；722G 可见分光光度计，上海精科公司；TG/ 有白烟出现，使有机硒转变成无机硒，冷却至室温，
DTA6300 热分析仪，上海将来实验设备有限公司； 用超纯水定容至 25 mL。取 2.0 mL 溶液按 1.2.3.1
X-Pert PRO MPD 型 X 射线衍射仪，荷兰帕纳科公 节方法测硒含量 [10] 。
司；LC-20AT 岛津高效液相色谱仪（HPLC），日本 1.3 测试与表征
岛津公司；Zeiss Auriga FIB 型扫描电子显微镜，德 1.3.1 紫外光谱分析
国卡尔蔡司公司。 称取冬凌草硒多糖及未修饰的冬凌草多糖各
1.2 方法 20 mg 分别置于锥形瓶中，加入 3.0 mL 混酸〔V(硝
1.2.1 冬凌草多糖提取 酸，质量分数 68%)∶V(高氯酸，质量分数 71%)=4∶
取冬凌草药材，经机械粉碎后，过 40 目筛得粗 1〕，盖上表面皿浸泡过夜，次日加热（190 ℃）消
粉，以液固比 10∶1（单位 mL∶g，以粗粉为基准， 解至消化液呈溶液澄清并伴有白烟出现，使有机硒转
下同）加入无水乙醇回流 2 次，每次 2 h，倾出上层 变成无机硒，冷却至室温，用超纯水定容至 25 mL。