Page 115 - 《精细化工》2021年第5期

第 5 期 羿月同，等: 红豆越橘花青素与金银花多酚协同抗氧化活性 ·969·

 i A  j A  1.2.8 总还原能力的测定
%  1  清除率/   100 （1）
 A 0  按照文献[20]稍作修改后的方法测定。在试管
1.2.4 清除 ABTS 自由基能力的测定 中加入样品溶液 1.0 mL、0.2 mol/L pH 6.6 的磷酸盐
按照文献 [19] 稍作修改 后的方法测 定。将 缓冲溶液 2.5 mL、质量分数为 1.0%的铁氰化钾溶液
7.00 mmol/L ABTS 溶液与 2.45 mmol/L 过硫酸钾溶 2.5 mL。混匀后置于水浴锅中 50 ℃水浴 20 min。
液以体积比 1∶1 混合后，避光 12 h 得到 ABTS 工 加入质量分数为 10.0%的三氯乙酸溶液 2.5 mL、蒸
作液，临用前以 0.1 mol/L pH=7.4 PBS 缓冲溶液将 馏水 2.5 mL、质量分数为 0.1%的三氯化铁溶液
其稀 释至 在 734 nm 下 测 试 时，其 吸光 度为 0.5 mL，混匀后反应 10 min。在 700 nm 处测定吸光
度 A，用蒸馏水为空白。
0.70±0.02。在 96 孔板的孔中加入样液 50 μL、稀释
1.2.9 联合作用指数
好的 ABTS 溶液 250 μL，混匀后避光反应 6 min，
利用 Talady 和 Chou 的中效原理 [12] 联合作用指数
于 734 nm 波长下测定吸光度 A i 。对照组用 0.1 mol/L
（CI）来判断红豆越橘花青素及金银花多酚复配对抗
pH=7.4 PBS 缓冲溶液代替 ABTS 溶液，测得吸光度
氧化指标是协同作用还是拮抗作用。CI 按式（5）计算：
A j 。空白组用蒸馏水代替样液，测得吸光度 A 0。样
D 1 D 2
品清除 ABTS 自由基能力按式（2）计算： CI   （5）
 i A  j A  D 1 x D x 2
%  1  清除率/   100 （2） 式中：D 1 和 D 2 为复配物 1 和复配物 2 联合作用抑制
 A 0  率为 50%时的质量浓度，mg/L，D x1 和 D x2 为复配物 1
1.2.5 清除羟基自由基能力的测定 和复配物 2 单独作用抑制率为 50%的质量浓度，mg/L。
按照文献[20]所述方法测定。在试管中依次加 当 CI<1 时，复配物 1 和复配物 2 联合作用效果
入 1.0 mL 样液、2 mmol/L 硫酸亚铁溶液 2 mL、 具有协同作用；当 CI=1 时，复配物 1 和复配物 2
6 mmol/L H 2 O 2 溶液 2 mL，充分振荡摇匀，静置 联合作用效果具有叠加作用；当 CI>1 时，复配物 1
10 min，再依次加入 2 mmol/L 水杨酸钠溶液 2 mL， 和复配物 2 联合作用效果具有拮抗作用。
混合均匀后置于 37 ℃水浴中静置 30 min，于 1.3 统计分析
510 nm 波长下测定混合物的吸光度 A i 。对照组用蒸 采用 Excel 2010、Origin 9.0 和 CompuSyn 等软
馏水代替水杨酸溶液，测得吸光度 A j 。空白组用蒸 件处理数据。
馏水代替样液，测得吸光度 A 0 。样品清除羟基自由
基能力按式（3）计算： 2 结果与讨论
 i A  j A 
%  1  清除率/   100 （3） 2.1 红豆越橘花青素及金银花多酚单独和联合作
 A 0 
用对自由基清除效果
1.2.6 清除超氧阴离子自由基能力的测定
红豆越橘花青素与金银花多酚单独和以不同复
按照文献[21]稍作修改后的方法测定。采用
配比联合作用对自由基清除能力如图 1 所示。由图
NBT-NADH-PMS 体系，试管中依次加入 0.05 mol/L
1 可知，红豆越橘花青素、金银花多酚及复配物对
Tris-HCl（pH=8.2）2.0 mL、936 μmol/L NADH 溶液
自由基清除能力均随着质量浓度增加而增强，具有
1.0 mL、300 μmol/L NBT 溶液 1.0 mL、样液 1.0 mL、
量效关系。红豆越橘花青素和金银花多酚的 DPPH
120 μmol/L PMS 溶液 1.0 mL，混匀后室温反应
自由基清除能力相差较大，除羟基自由基外，红豆
5 min，在 560 nm 处测定吸光度 A i 。对照组用 Tris-
越橘花青素清除 DPPH、ABTS 和超氧阴离子自由基
HCl 代替 PMS，测得吸光度 A j 。空白组用 Tris-HCl
的能力明显强于金银花多酚。
代替样液，测得吸光度 A 0 。样品清除超氧阴离子自
由基能力按式（4）计算：
 i A  j A 
%  1  清除率/   100 （4）
 A 0 
1.2.7 铜离子还原能力的测定
按照文献[22]稍作修改后的方法测定。在 96
孔板的孔中加入样液 5 μL、5 mmol/L 硫酸铜溶液
50 μL、7.5 mmol/L 新铜试剂 50 μL 和 1 mmol/L 醋
酸铵缓冲液 50 μL、蒸馏水 50 μL，混匀后室温反应
30 min，在 450 nm 处测定吸光度 A，蒸馏水作空白。