Page 125 - 《精细化工》2021年第5期

第 5 期 朱雅雯，等: 金柑结合多酚的制备及其对 RAW 264.7 巨噬细胞免疫调节活性 ·979·

水果的 EPP 和 NEPP 提取。 LPS 组 NO 生成量视为 100%并与之相比，质量浓度
为 10 mg/L 的 NEPP NO 生成量和 LPS 组相近，不
表 5 不同提取方法对不同水果中 EPP 和 NEPP 含量的影响
Table 5 Effects of different extraction methods on EPP and 具备统计学差异（p>0.05）；质量浓度为 50 mg/L 的
NEPP contents in different fruits NEPP 的 NO 生成量为 88.89%；质量浓度为 100 mg/L
EPP 含量 NEPP 含量 的金柑 NEPP 的 NO 生成量为 84.21%，说明质量浓
原料 提取方法
/(mg GAE/g DW) /(mg GAE/g DW)
度为 50 和 100 mg/L 的金柑 NEPP 能够显著抑制 NO
蓝莓 [28] 酸法 14.58 27.25 的分泌（p<0.05），且呈浓度依赖性。结果表明，金
番石榴 [29] 酸法 1.36 2.46
金柑 [17] 碱法 4.80 1.79 柑 NEPP 能够有效抑制 LPS 刺激的 RAW 264.7 细胞
金柑 [30] 正丁醇 4.128 — 产生 NO，提高其抗炎能力。
蔓越莓 [11] 碱法 256.10 35.59
“—”代表未测。

2.3 金柑 NEPP 的免疫调节活性研究
2.3.1 金柑 NEPP 对 RAW 264.7 细胞生长的影响
采用 MTT 法检测 NEPP 对 RAW 264.7 细胞的
活性 [31-32] ，结果见图 5。从图 5 可见，RAW 264.7
细胞的存活率随金柑 NEPP 质量浓度的增加而降
低，在 NEPP 质量浓度为 10 mg/L 时细胞存活率为
99.57%（p<0.05），而当 NEPP 质量浓度高于 175 mg/L

后，细胞存活率低于 50%（p<0.05）。结果表明，NEPP
*表示与 LPS 组相比差异显著（p<0.05），下同
质量浓度低于 175 mg/L 时对 RAW 264.7 细胞毒性较
图 6 金柑 NEPP 对 LPS 刺激的 RAW 264.7 NO 释放的影响
小，不会影响其生长；当 NEPP 质量浓度≤100 mg/L Fig. 6 Effect of NEPP on RAW 264.7 NO release stimulated
时，RAW 264.7 细胞的存活率在 75%以上，对 RAW by LPS

264.7 细胞的生长无毒性作用。因此，选择 NEPP 质 2.3.3 金柑 NEPP 对 RAW 264.7 细胞吞噬活性的影响
量浓度为 10~100 mg/L 进行实验。 巨噬细胞是机体免疫系统的重要组成成分，当

巨噬细胞受到活化信号的刺激时, 即可活化而发挥
免疫效应，保护细胞免受细菌与病毒的侵染 [33] 。中
性红法检测法作为一种快速检验巨噬细胞吞噬功能
的常用细胞模型，通过巨噬细胞对中性红的吞噬量
来反映细胞的吞噬能力，检测结果如图 7 所示。

图 5 金柑 NEPP 对 RAW 264.7 细胞生长的影响
Fig. 5 Effect of NEPP on RAW 264.7 cells growth

2.3.2 金柑 NEPP 对 RAW 264.7 细胞 NO 生成量的
影响
NO 是一种重要的炎性因子，具有一定的组织

及细胞毒性，可以引起氧化损伤使细胞变性和组织 图 7 金柑 NEPP 对 RAW 264.7 细胞吞噬活性的影响
粘连，从而加重炎症反应，故抑制巨噬细胞分泌 NO Fig. 7 Effect of NEPP on phagocytic activity of RAW 264.7
是抗炎的重要方法之一 [20] 。图 6 为金柑 NEPP 对 LPS cells
刺激的 RAW 264.7 NO 生成量的影响。 与空白组比，LPS 能显著刺激巨噬细胞吞噬中
由图 6 可知，经 LPS 刺激后的 RAW 264.7 巨噬 性红。RAW 264.7 细胞在 LPS 刺激下，吞噬功能增
细胞培养基上清液中 NO 的释放量显著增加，差异 强，且差异具有统计学意义（p<0.05），在 NEPP 质
具有统计学意义（p<0.05），这表明 LPS 诱导 RAW 量浓度为 10~100 mg/L 内，随着 NEPP 质量浓度的升
264.7 巨噬细胞释放 NO 的炎症模型建模成功。将 高，RAW 264.7 巨噬细胞的吞噬指数随之增大。其