Page 157 - 《精细化工》2021年第5期
P. 157

第 5 期                        陈美玲，等: CMG-EGCG 的合成及其抗氧化活性                                 ·1011·


            1.5   抗氧化活性测定                                      2   结果与讨论
            1.5.1  DPPH 自由基清除实验
                 DPPH 自由基（DPPH•）清除实验对文献[12]                    2.1  FTIR 分析
            的方法做了一些改变。具体方法：配制 0.05 mmol/L                          图 1 为 CMG、CMG-EGCG、EGCG 的 FTIR 谱
            DPPH 甲醇溶液，0.2~1.0 g/L 质量浓度梯度的样品                    图。从 CMG 的谱图可知，1072、1037 和 885 cm            –1
                                                                                                [3]
            水溶液，静置 25 min，取 200  μL 质量浓度分别为                    处归属于酵母 β-葡聚糖的特征吸收峰 ，1723 cm                 –1
            0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 g/L 样品水溶液的上清液，                 处归属于质子化的—COOH 的特征吸收峰。与 CMG
            分别与 3 mL DPPH 甲醇溶液充分混合 2 min，避光                    相比较，CMG-EGCG 的—COOH 特征峰减弱，并出
                                                                                      –1
            保存 10 min 后，在 517 nm 处测定溶液吸光度。样                    现了 1674、1589、1141 cm 新的吸收峰，分别对应
            品对 DPPH 自由基清除率按式（1）计算：                             酯的 C==O 伸缩振动、芳香族的 C==C 伸缩振动、
                   DPPH清除率    / %   (A   A  ) / A   100  （1）   醇的 C—O 伸缩振动   [15] ，由此可知，CMG 和 EGCG
                                      0  1    0
            式中：A 1 为反应后 DPPH 溶液的吸光度；A 0 为空白                    已经偶联成功。
            的 DPPH 溶液的吸光度。
            1.5.2  ABTS 自由基清除实验
                                   +
                 ABTS 自由基（ABTS •）清除实验参照文献[13]，
            取 10 mL 7 mmol/L ABTS 水溶液与 10 mL 4.9 mmol/L
            K 2 S 2 O 8 溶液混合，在室温、黑暗状态下静置 15 h，
                      +
            制备 ABTS •溶液。用 10 mmol/L 磷酸盐缓冲液（PBS，
                              +
            pH 7.4）调节 ABTS •溶液在 734 nm 处的吸光度，
            使吸光度位于 0.70±0.05 范围内。配制 0.2~1.0 g/L
            质量浓度梯度的样品水溶液，静置 25 min，取 200 μL
                                            +
            各样品溶液的上清液与 3 mL  ABTS •溶液混匀，反

            应 60 min 后，在 734 nm 处测定溶液吸光度，样品                       图 1  EGCG、CMG-EGCG 和 CMG 的 FTIR 谱图
                    +
            对 ABTS •清除率的计算公式（2）如下               [13] ：          Fig. 1    FTIR spectra of CMG, CMG-EGCG and EGCG
                       +
                  ABTS 清除率    / %   (A   A ) / A   100  （2）
                                      0   1   0
                                    +
            式中：A 1 为反应后 ABTS •溶液的吸光度；A 0 为空                    2.2  UV-Vis 光谱分析
                      +
            白的 ABTS •溶液的吸光度。                                       图 2 比较了 EGCG、CMG、CMG-EGCG 的
            1.5.3   还原性能测试                                     UV-Vis 光谱。为了去除溶剂的干扰，使用去离子水
                 还原能力的测试参照文献[14]的方法。配制                         作为空白样。由图 2 可知，EGCG 在 274 nm 处显
            0.2~1.0 g/L 质量浓度梯度的样品水溶液，取 2.5 mL                  示出特征吸收峰       [16] 。但该吸收峰在 CMG-EGCG 的
            上清液，依次加入 2.5 mL 0.2 mol/L 磷酸钠缓冲溶液                  紫外光谱中发生了红移，由 274 nm 红移至 280 nm
            （PBS, pH 6.6）、2.5 mL（质量浓度为 10 g/L）铁氰               处且变宽，这是由于 EGCG 与 CMG 接枝之后，分
            化钾溶液，混匀；在 50  ℃下反应 20 min，迅速置                      子内的芳香部分由自由态变为共轭态，这个结论与
            于冰水浴中冷却；再加入 2.5 mL（质量浓度为     VITTORIO 等                        [17] 报道的一致。而在 CMG 的 UV-Vis
            100 g/L）三氯乙酸溶液，混匀 2 min；在 4000 r/min               光谱中未发现相应的特征吸收峰。
            下离心 10 min，取上清液 2.5 mL，加入 2.5 mL 去离
            子水，0.5 mL（质量浓度为 1 g/L）三氯化铁溶液，
            混匀；25  ℃下放置 10 min 后，在 700 nm 处测定溶
            液吸光度（A），吸光度越高，说明还原性越好。用
            样品在 700 nm 处的 A 表示还原能力。
            1.6   颜色稳定性考察
                 配制质量浓度为 0.6 g/L 的 EGCG 和 CMG-EGCG
            水溶液，移取部分上清液于称量瓶中，将称量瓶置
            于太阳光下日晒。对比同等条件下两样品溶液的颜
            色变化。实验于 2020 年 5 月 10 日 10 点~2020 年 5

            月 14 日 10 点期间完成，平均日晒 6 h 后，其余时                       图 2  EGCG、CMG-EGCG 和 CMG 的 UV-Vis 谱图
            间室温保存，总实验时长 96 h。                                   Fig. 2    UV-Vis spectra of CMG, CMG-EGCG and EGCG
   152   153   154   155   156   157   158   159   160   161   162