Page 156 - 《精细化工》2021年第5期

·1010· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 38 卷

活性，但研究多是涉及生物医药方面和小分子抗氧 公司；ABTS、Folin-Ciocalteu 试剂，分子生物学级，
化剂，对于化妆品原料方面的葡聚糖类大分子抗氧 大连美仑生物技术有限公司；K 2 S 2 O 8 、三氯化铁，
化剂的研究甚少，且大多并未讨论接枝产物的颜色 AR，国药集团化学试剂有限公司；二甲基亚砜
[4]
稳定性问题。MORENO-VÁSQUEZ 等 研究表明， （DMSO），AR，上海麦克林生化科技有限公司。
EGCG 功能化修饰的壳聚糖比壳聚糖本身具有更 Nicolet 6700 型全反射傅里叶变换红外光谱仪，
高的抗氧化活性，EGCG 的含量为 28.7 mg/g 时，其 美国 Thermo Scientific 公司；TU-1901 型双光束紫
–3
抗氧化活性并不强，质量浓度为 1.0×10 mg/L 时， 外-可见分光光度计，北京普析通用仪器有限公司；
对 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和 2,2′-叠氮 TGA/1100SF 型热重分析仪，Mettler Toledo 国际贸
基-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基的 易（上海）有限公司。
清除率分别为 32%和 40%。 1.2 CMG-EGCG 的制备
鉴于 1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐 称取 1.5 g Na-CMG 溶于 50 mL 丙酮，滴加
酸盐(EDC)/4-二甲氨基吡啶（DMAP）化学偶联法原 2 mmol/L 盐酸调节 pH 至 2~3，搅拌 30 min。并依
料低毒性、过程简单可控，易于操作 [10-11] 。本文拟 次用乙醇水溶液（体积分数为 80%）、无水乙醇洗涤，
采用 EDC/DMAP 化学偶联法将 EGCG 接枝到羧甲 直到溶液呈中性，将过滤固体置于 50 ℃真空干燥
基酵母(1,3/1,6)-β-D-葡聚糖的羧基上，以提高羧甲 箱中干燥 24 h，得 1.15 g 粉末，即为羧甲基酵母
基酵母(1,3/1,6)-β-D-葡聚糖的抗氧化性能。并进行 (1,3/1,6)-β-D-葡聚糖（CMG）。
红外、紫外和热重的测试，分析 CMG-EGCG 的结构 取 0.87 g CMG（1.26 mmol）分散于 60 mL
和热稳定性。通过检测 CMG-EGCG 在 DPPH 自由 （体积分数为 50%）DMSO 水溶液中；加入 1.00 g
基清除，ABTS 自由基清除和还原能力三方面的活 （5.2 mmol）EDC 和 0.20 g（1.6 mmol）DMAP，于
性来评估其抗氧化性能。 5 ℃下冷水浴反应 10 min；取 2.17 g（4.73 mmol）

EGCG〔其中，n(CMG)∶n(EGCG)=1.00∶3.75〕溶
1 实验部分
于 10 mL DMSO 中，再逐滴加入反应体系，于 5 ℃
1.1 试剂与仪器 下冷水浴反应 10 min；最后，将反应温度升至 30 ℃，
羧甲基酵母(1,3/1,6)-β-D-葡聚糖钠（Na-CMG， 继续搅拌 16 h。反应结束，依次用乙醇和甲醇洗涤，
取代度=0.78，质量分数≥90%），广州诗茗化工有限 该操作重复 3 次，将过滤固体置于 50 ℃真空干燥
公司；EGCG（质量分数≥95%），江苏德和生物科 箱中干燥 24 h，得到 0.83 g 淡黄色粉末，即为羧甲
技有限公司；EDC、DMAP、铁氰化钾、三氯乙酸， 基酵母(1,3/1,6)-β-D-葡聚糖-表没食子儿茶素没食子
AR，上海阿拉丁生化科技股份有限公司；DPPH（质 酸酯接枝共聚物，记为 CMG-EGCG。CMG-EGCG
量分数≥97%），梯希爱（上海）化成工业发展有限 的合成路线如下所示：

1.3 表征与性能测试 样品水溶液的上清液，加入 1 mL 稀释 3 倍之后的
FTIR 测试：采用全反射傅里叶变换红外光谱仪 Folin-Ciocalteu 试剂，2 mL（质量浓度为 280 g/L）
对样品进行测试；UV-Vis 测试：CMG 和 CMG-EGCG 碳酸钠溶液，充分混匀 2 min；再加入 2 mL 去离子
水溶液的质量浓度为 0.3 g/L，EGCG 水溶液的质量 水，静置 30 min 后，在 760 nm 处测定吸光度。
浓度 0.1 g/L，波长范围是 250~400 nm；TGA 测试： 以 EGCG 水溶液（质 量浓度范围 为 0.01~
在氮气下，测试温度设为 50~800 ℃，升温速率为 0.05 g/L）为标准样品，得到标准曲线方程为 y=
2
10 ℃/min，测试样品质量约为 5 mg。 17.05x+0.01583，R =0.99。其中，x 为接枝的 EGCG
1.4 EGCG 含量测定 质量浓度，mg/L；y 为样品在 760 nm 处的吸光
CMG-EGCG 中的 EGCG 含量测定采用 Folin- 度。EGCG 含量由每克样品中所含 EGCG 毫克数来
[4]
Ciocalteu 法 测定。取 1 mL（质量浓度为 1.0 g/L） 表示。