Page 94 - 《精细化工》2021年第6期
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·1156·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 38 卷

                 肝癌具有中国特色，中国占世界肝癌发病人数                          织和癌组织的区分        [20] 。
            的 55%以上，每年新增患者 46 万，新增死亡病例                             基于上述原因，本研究采用羧基修饰的聚乳酸-
            42 万 [1-2] 。目前，肝脏切除术是国际公认的肝癌首选                     羟基乙酸共聚物（PLGA—COOH）包覆 Ag 2 S 来制
            根治性疗法。然而，肝癌具有高异质性和高侵袭性                             备 PLGA@Ag 2 S 纳米粒子，通过肝癌特异性的靶向
            的病理特点，其边界并不十分规则，因此在外科手                             多肽 SP94 修饰实现肝癌的特异性识别。在生理环境
            术中肝癌边界难以精准识别，其发生的微小转移灶                             中，随着 PLGA 外壳的降解，Ag 2 S 纳米粒子将被释
            （≤5 mm）在术中也难以有效发现，种种情况均容                           放出来而产生较强的近红外Ⅱ区荧光信号，从而实
            易导致癌灶术后残留，从而导致术后 5 年复发率超                           现肝癌的精准成像。对制备的纳米粒子进行表征，考
                [3]
            70% 。为应对以上临床问题，近年来国内外开展了                           察其降解行为，并评价其生物安全性，将其用于近红外
            系列新技术的探索。                                          Ⅱ区荧光引导的荷瘤小鼠的手术导航中，以期获得能够
                                      [4]
                 2011 年，VAN DAM 等 开展了小分子荧光探                    精准手术，减少肿瘤复发的近红外Ⅱ区的纳米探针。
            针引导卵巢癌手术切除的首次人体研究，为肿瘤切
                                        [5]
            除手术带来了新方向。JIN 等 前期运用靶向多肽                           1    实验部分
            SP94 修饰的近红外荧光染料 IRDye800 开展了肝癌                     1.1   试剂与仪器
            的术中荧光导航切除的研究。小分子荧光探针具有                                 PLGA—COOH（M n =1.8×10 ，其中，丙交酯
                                                                                             4
            血液循环时间短、靶向效果较差、发光量子效率低、                            与乙交酯物质的量比为 75∶25），山东省医疗器械
            术中信噪比差等缺点，难以满足分子影像手术导航                             研究所；聚乙烯醇（M n = 1.08×10 ，PVA），中国医
                                                                                             4
            的要求。与小分子相比，纳米探针能够显著提高肿                             药集团有限公司；AgNO 3 、Na 2 S、1-乙基-(3-二甲基
                                 [6]
            瘤靶向性和成像信噪比 。国外多个团队开展了新                             氨基丙基)碳二亚胺（EDC）、N-羟基琥珀酰亚胺
            型纳米探针在肝癌诊疗领域的研究。2015 年，东京                          （NHS）、北京伊诺凯科技有限公司；荷瘤小鼠（鼠
            大学研发了一种肿瘤微环境敏感的纳米粒子可以检                             龄鼠龄 4~6 周），北京维通利华有限公司；靶向多肽
                                     [7]
            测到毫米级的微小肝转移灶 。2016 年，莱斯大学                          SP94，上海强耀生物有限公司；其他试剂均为市售
            的学者研究发现，以近红外脉冲激光激发等离子纳                             分析纯。
                                                       [8]
            米泡可用于肝癌等肿瘤的术中探测和引导切除 。                                 Sonicator 4000 型探头超声仪，美国 Misonix 公
            2018 年后，本课题组制备了靶向多肽 SP94 修饰的                       司；FJ-200 型高速均质机，江苏金坛市晶玻实验仪
                           [9]
            聚吡咯纳米粒子 ，对肝癌显影效果及最佳成像时                             器厂；Avanti J-25 型高速离心机，美国贝克曼公司；
            间窗均有很大的改善，但肝脏内血液、脂类成分等                             BI-90Plus/ZetaPALS 型激光动态粒度仪/电位仪，美
            对荧光信号有一定吸收，这限制了光学成像的深度，                            国布鲁克海文公司；FS5 型集成稳态荧光光谱仪，
            从而导致其应用受到了很大限制                [9-11] 。与可见光区        英国爱丁堡仪器公司；MLS-3780 型高压灭菌锅，日
            和近红外Ⅰ区荧光相比，近红外Ⅱ区（1000~1700                         本三洋公司；Tecnai G2 型透射电子显微镜，荷兰
            nm）荧光在机体的散射和组织吸收变少，此波段的                            FEI 公司；Synergy HT 型多功能微孔板检测仪，美
            生物自荧光效应极低，在体内成像中呈现出更深的                             国 Bio-tek 公司；BD Accuri® C6 Plus 型流式细胞仪，
            组织穿透深度及更高的空间分辨率等优势，因此其                             美国 BD 公司；DMI 3000 型荧光显微镜，德国徕卡
            在荧光成像引导的手术切除领域具有更好的应用前                             公司；Uninano FB2000 型近红外Ⅱ区光学手术导航
            景 [10,12] 。目前已报道的近红外Ⅱ区荧光材料主要包                      系统，美国 Uninano 公司。
            括小分子和纳米材料。其中，小分子材料存在的问                             1.2    制备方法
            题和近红外Ⅰ区荧光探针一样，肝癌特异性差、最                                 首先，用 2.0 mol/L  NaOH 溶液调节 1.0 mL
            佳成像时间窗短、发光量子效率低等。目前研究比                             （20 mmol/L）AgNO 3 溶液的 pH  至 12；然后，在
            较多的纳米材料主要为 Ag 2 Se、PbS、PbSe、CdHgTe                 转速 500 r/min 下，将 0.1 mol/L Na 2 S 溶液缓慢滴加
                                                                                                         +
            等，这些纳米材料大多是基于 Pb、Cd、Hg、Se 和                        到上述溶液中，并在 55  ℃反应 4 h，其中，n(Ag )∶
                                                                  2–
            Te 等含有急性或者慢性毒性的材料，且合成操作过                           n(S )=1∶2。反应结束后，离心除去上清液，固体
            程相对繁琐，反应条件严苛，大大限制了其在生物                             在真空干燥箱中 40  ℃下干燥 12 h，得到 Ag 2 S 纳米
            领域的应用      [13-15] 。Ag 2 S 半导体纳米材料是一种近红            粒子。
            外Ⅱ区发光材料，具有良好的生物相容性、最佳的                                 将 1 mg（4 µmol）Ag 2 S 纳米粒子与 5 mg
            光谱范围以及易于功能化优点，是体内成像的理想                             （1 µmol）PLGA—COOH 分散在 5 mL 氯仿中，得
            探针   [16-19] 。但这类量子点容易在肝脏发生聚集，滞                    到的分散液与 40 mL 质量分数 0.3%的 PVA 水溶液
            留时间长达 24 h，易产生肝毒性，且不利于正常组                          混合，超声均质 5 min 后，将其在 40  ℃下搅拌过夜，
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