Page 152 - 《精细化工》2021年第8期

·1646· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 38 卷

1.2.1 1-二苄基氨基-1-脱氧-D-果糖（化合物Ⅱ）的 DMSO-d 6 ), δ: 155.5 (C2、5), 141.8 (C3、6), 107.6
合成 (C6′、6″), 78.9 (C1′、1″), 77.7 (C2′、2″), 70.6 (3′、3″),
按照文献[22]的方法来制备化合物Ⅱ。将 3.6 g 59.8 (4′ 、 4″), 26.8 (C5′、 5″), 25.4 (C7′ 、 7″) 。
（20 mmol）D-葡萄糖加入到三口烧瓶中，再加入 MS(API-ES), m/Z: [C 18 H 28 N 2 O 8 +H] 理论值 401.1，测
+
+
40 mL 无水乙醇，室温下搅拌，然后依次加入 3.96 g 试值 401.1；[C 18 H 28 N 2 O 8 +Na] 理论值 423.1，测试值
（20 mmol）二苄胺，1 mL 冰乙酸，搅拌均匀，在 423.1。
80 ℃下回流 3 h，冷却至室温，抽滤，滤饼使用无 1.2.4 FZ（化合物Ⅴ）的合成
水乙醇 3×10 mL 洗 涤 并抽滤， 得 到白色固 体 将 100 mg（0.25 mmol）异丙叉基保护果糖嗪加
(3S,4R,5R)-2-[( 二苄氨基 ) 甲基 ] 四氢 -2H- 吡喃 - 入 100 mL 反应瓶中，再加入 30 mL 体积分数为 80%
1
2,3,4,5-四醇 5.9 g，收率 82%。 HNMR (400 MHz, 的乙酸水溶液，30 ℃下搅拌 8 h，旋蒸除去溶剂，
DMSO-d 6 ), δ: 7.30 (m, 10H, Ph—H), 5.25 (s, 1H, OH), 得到白色固体用甲醇（3×10 mL）洗涤，25 ℃下干
4.43 (s, 1H, OH), 4.38 (s, 1H, OH), 4.15 (s, 1H, OH), 燥 6 h 后得(1R,1′R,2S,2′S,3R,3′R)-1,1′-(2,5-吡嗪)-双-
3.81 (d, J = 12.0 Hz, 1H, H-6a), 3.74 (d, J = 13.8 Hz, 1,2,3,4-丁四醇，即 FZ 41 mg，收率 51%。 HNMR
1
2H, H-7), 3.66 (s, 1H, H-5), 3.63 (d, J = 13.8 Hz, 2H, (600 MHz, DMSO-d 6 ), δ: 8.62 (s, 2H, H-3、6), 5.33 (d,
H-8), 3.55~3.60 (d, 2H, H-3、4), 3.43 (d, J = 12.0 Hz,
J = 6.3 Hz, 2H, OH-1′、1″), 4.96 (d, J = 6.3 Hz, 2H,
1H, H-6b), 2.68 (q, J = 13.3 Hz, 2H, H-1)。
H-1″), 4.66 (d, J = 4.5 Hz, 2H, OH-4′、4″), 4.43 (d, 2H,
1.2.2 1-二苄基氨基-1-脱氧-4,5-氧-异丙叉基-D-果
OH-2′、2″), 4.39 (t, 2H, OH-3′、3″), 3.67~3.60 (m, 2H,
糖（化合物Ⅲ）的合成
H-2′、2″), 3.61~3.50 (m, 4H, H-3′、3″), 3.42 (dt, J =
将化合物Ⅱ3.5 g（6.96 mmol）和原甲酸三甲酯
4.5 Hz, H-4′、4″)。MS(API-ES), m/Z: [C 12H 20N 2O 8 +H] +
2.0 mL（18.3 mmol）加入到 80 mL 丙酮中，降温至
+
理论值 320.1，测试值 320.1；[C 12 H 20 N 2 O 8 +Na] 理论
0 ℃，加入 0.6 mL 浓盐酸。在 0 ℃搅拌 2.5 h 后，
值 343.1，测试值 343.1。
用氨水中和反应混合物至中性，旋转蒸发除去丙酮，
1.2.5 HPLC 测试
二氯甲烷萃取（3×50 mL），干燥有机相，旋转蒸发
测试条件：色谱柱为华普 Unitary C18（4.6 mm×
除去二氯甲烷，得到无色油状物 1-二苄基氨基-1-脱
250 mm×5 μm）；流动相为 V(水)∶V(甲醇)=90∶10；
氧-4,5-氧-异丙叉基-D-果糖 1.94 g, 收率 70%。
1 流速为 1 mL/min；检测波长 275 nm；检测方法为面
HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ), δ: 7.33~7.25 (m, 10H,
Ph—H), 5.53 (s, OH), 4.78 (d, 1H, OH), 4.11 (dd, 1H, 积归一化法。
H-4), 4.03~3.93 (m, 2H, H-6), 3.75 (d, J = 14.0 Hz, 1.3 抗衰老活性评价
2H, H-10), 3.75 (d, 1H, H-5), 3.60 (d, J = 14.0 Hz, 2H, 1.3.1 细胞培养
H-11), 3.45 (t, 1H, H-3), 2.69 (s, 2H, H-1), 1.38 (s, 3H, 从人胚肺二倍体成纤维细胞中分离的 2BS 细胞
H-7), 1.26 (s, 3H, H-9)。 系最初是由中国生物制品研究所建立的，并被广泛
1.2.3 异丙叉基保护果糖嗪（化合物Ⅳ）的制备 用于细胞衰老模型。一般认为，在 PD30（种群倍增
将化合物Ⅲ2.0 g（5.01 mmol）溶于 30 mL 无水 次数，亦称作“代”）以下为年轻细胞，复制性衰老
乙醇，然后将其加入到 100 mL 圆底烧瓶中使用 N 2 细胞则为 PD55 或以上。2BS 细胞在质量分数 10%
气置换 3 次，加入 0.2 g Pd/C（Pd 质量分数 10%）， 的胎牛血清、质量分数 1%的青霉素和链霉素双抗液
H 2 置换 3 次。室温下，H 2 氛围下搅拌 12 h。TLC〔V(三 的基本培养基（MEM）中生长，置于 37 ℃、体积
氯甲烷)∶V(甲醇)∶V(水)=10∶3∶1〕跟踪反应过 分数 5%的 CO 2 培养箱中。当细胞生长 3~4 d 时，将
程，撤去 H 2 ，反应通空气，室温继续搅拌 12 h。抽 培养的细胞按细胞数目 1∶2 或 1∶4 的比例分裂传
滤除去 10%Pd/C，旋转蒸发除去乙醇，抽滤，所得 代。细胞累积倍增次数（CPDs）计算为 log 2 (D/D 0 )，
粗产品经二氯甲烷洗涤，得到淡黄色固体吡嗪-2,5- 其中，D 和 D 0 分别为收获和接种时的细胞密度
双[(1R,2S,3R)-2,3-氧-异丙叉基-1,2,3,4-丁四醇]，即 （个/mL）。
1
异丙叉基保护果糖嗪 522 mg，收率 56%。 HNMR 1.3.2 MTT 实验
(400 MHz, DMSO-d 6 ), δ: 8.63 (s, 2H, H-3、6), 5.53 (d, 将 2BS 细胞按 3×10 个/孔的密度接种于平底 96
3
2H, OH-1′、1″), 4.99 (t, 2H, H-1′、1″), 4.81 (m, 2H, 孔板中。24 h 后，将细胞置于含不同浓度药物的培
OH-4′ 、 4″), 4.45 (dd, 2H, J=4.2 Hz, H-4′ 、 4″), 养基中培养 48 h。每孔加入 20 μL 质量浓度为 5 g/L
4.30~4.09 (m, 2H, H-4′、4″), 3.91~3.60 (m, 4H, H-2′、 的 MTT。避光孵育 4 h 后，吸除孔内药液，每孔加
2″、3′、3″), 1.49~1.37 (m, 6H, H-6′、6″、7′、7″), 1.21 入二甲基亚砜（DMSO）200 μL。用酶标仪测定吸
(d, 6H, H-5′、 5″ 、 7′ 、 7″); 13 CNMR (100 MHz, 光度（A），检测波长为 570 nm，检测温度为 37 ℃。