Page 72 - 《精细化工》2021年第8期
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·1566·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 38 卷

            绘制标准曲线。取 1 mL 脂质体溶液加入 2 mL 乙醇，                     精油含量，μg。
            超声处理 10 min，并用蒸馏水定容到 5 mL。采用紫                          为排除温度过高导致精油释放过快的影响，考
            外-可见分光光度计，对上述制备样品进行吸光度测                            察抗氧化复合膜对温度响应的敏感程度，将 100 mm×
            定。根据标准曲线计算出温敏脂质体中 REO 含量，                          100 mm 抗氧化复合膜放置于恒温恒湿箱中，温度范
            按公式（1）计算 REO 包封率：                                  围 35~44  ℃，每个设定温度下释放 24 h，分别取样
                                                              测定其精油释放率。
                           包封率    / %   E    100    （1）
                                       T                          DPPH 自由基清除率测定：采用 DPPH 法测定
            式中：ρ E 为被脂质体包封的精油量，mg；ρ T 为脂                       抗氧化复合膜自由基清除率             [23-24] 。配制 100  μmol/L
            质体中加入总精油量，mg。                                      DPPH 乙醇溶液。将抗氧化复合膜（20 mm×20 mm）
                 AFM 观察：取适量温敏脂质体混悬液用超纯水                        均匀裁剪为碎片，放入棕色样品瓶中与 2 mL 无水乙
            稀释，吸取 2 μL样品滴在新解离云母片表面并铺展，                         醇和 2 mL DPPH 无水乙醇溶液混合，在室温黑暗环
            室温下自然干燥 24 h。样品置于原子力显微镜进口                          境中静置温育 0.5 和 24 h，检测其吸光度，记为 A s 。
            Si 探针下，采用 Scan Asyst 模式扫描。扫描频率 0.977               2 mL 无水乙醇与 2 mL DPPH 无水乙醇溶液于棕色
            Hz，分辨率 512×512，扫描尺寸 5 μm×5 μm。图像                   样品瓶中混合，作为对照组，其吸光度记为 A c 。抗
            处理采用配套软件 NanoScope。                                氧化复合膜 DPPH 自由基清除率为：
                 粒径、多分散性指数（PDI）、Zeta 电位测定：                                  DPPH / %   A   A s    100    （3）
                                                                                        c
            采用 Zeta 电位及纳米粒度分析仪对温敏脂质体混悬                                           s       A c
            液平均粒径（Size）、PDI 和 Zeta 电位进行测定。                     式中：DPPH s 为 DPPH 自由基清除率，%；A s 为抗
            取 1 mL  温敏脂质体混悬液，稀释到适当浓度，装                         氧化复合膜样品吸光度；A c 为对照组吸光度。
            入粒径或电位样品池中，在 25  ℃下进行分析测定。                         2   结果与讨论
                 DSC 测定：将制得温敏脂质体混悬液超速离心
            20 min 移去上层清液，收集下层温敏脂质体，称取                         2.1   温敏脂质体冷冻干燥工艺考察
            5~10 mg  铺于铝坩埚底部，在加热范围 20~60  ℃内                       为改善温敏脂质体长期稳定性，对其采用冷冻
            扫描，升温速率 5  ℃/min，重复两次，测定 DSC                       干燥工艺。为寻找合适的冷冻干燥工艺，分别考察
            曲线，以空白坩埚作为对照。                                      了乳糖含量（以温敏脂质体混悬液的质量为基准）
                 SEM 观察：抗氧化复合膜形貌用扫描电子显微                        和冻干程序对冻干脂质体外观及复水的影响，结果
            镜进行观察，截面膜样品需先使用液氮进行脆断，                             见表 1。从表 1 可以看出，当乳糖含量较低时冻干
            进行喷金处理后再观察其形貌。                                     脂质体复水较慢且溶液透明度不高，室温放置 2 h
                 机械性能测定：采用拉伸强度和断裂伸长率来                          后溶液变浑浊；当乳糖含量增至 9%时，复水迅速且
            评价复合膜的机械性能，参照文献                 [21] 方法进行测定        溶液透明，室温放置 2 h 后溶液依然透明，稳定性
            和计算。                                               良好；继续增至 12%，复水速度变慢且复水后不稳
                 氧气透过量测定：薄膜氧气透过量参照 GB/T                        定，室温放置 2 h 后溶液变浑浊。因此，最佳配方
            19789—2005《包装材料  塑料薄膜和薄片氧气透过                       为乳糖含量 9%。表 2 中程序 1 所制备的冻干样品外
            性试验  库仑计检测法》进行测定。                                  观致密，复水速度慢溶液较透明；程序 2、3 所制备
                 释放速率测定：采用紫外-可见分光光度法测定                         的冻干样品外观疏松，复水速度快溶液透明，且稳
            精油释放速率       [22] 。为考察抗氧化复合膜中精油在不                  定性良好。结果表明，较长的预冻时间和升华干燥
            同温度下的释放情况，将制备得到的抗氧化复合膜                             时间有助于完整保持脂质体的膜结构，且经测定，
            裁剪为 100 mm×100  mm 的试样，分别放置于温度                     冻干迷迭香精油温敏脂质体复水后的粒径和包封率等
            为 4、23 和 42  ℃、湿度为 50%的恒温恒湿箱中，每                    均无显著变化。综合考虑效果及成本因素最终选择程
            隔 1 d 取样，放入装有 10 mL 无水乙醇的密封离心管                     序 2 作为温敏脂质体的冻干程序进行后续实验。
            中，保证试样完全浸没，放置于 23  ℃恒温箱中 3 d，
                                                                     表 1   不同含量乳糖对温敏脂质体的影响
            取上清液，采用紫外-可见分光光度计测量 264 nm 处吸                      Table 1    Effects of different content of lactose on
            光度，对照标准曲线，计算得到薄膜中精油释放率（R）：                                  temperature-sensitive liposomes
                                  R   R                        乳糖含量/%       外观评价       复水评价      室温放置 2 h
                            R / %   0  n    100     （2）           5       溶液较透明      复水较慢        溶液较浑浊
                                    R 0                             7       溶液较透明      复水较迅速       溶液略浑浊
                                 2
            式中：R 为每 100 cm 薄膜中精油释放率，%；R 0                           9       溶液透明       复水迅速        溶液透明
            为第 0 d 薄膜中精油含量，μg；R n 为第 n  d 薄膜中                       12      溶液透明       复水较迅速       溶液较透明
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