Page 163 - 《精细化工》2021年第9期

第 9 期 于昊泽，等: 呋咱及二氢卟吩 e6 缀合物的合成及光动力抗肿瘤活性评价 ·1877·

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1.2.2 化合物Ⅳ的合成 1.7 J/cm ，在照射时间为 0、1、5、10、20、30、60 min
二氢卟吩 e6 结构中含有三个羧基（13,15,17 时测量化合物的吸光度。根据式（1）计算光致漂白
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位），在适量的缩合剂存在下，会得到相应的 13 :15 - 的程度：
酸酐，再与羟基或氨基等亲核基团反应，优先得到 相对吸收强度=A t /A 0 （1）
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15 位的缀合物 [38] ，利用此方法可实现对 15 位的选 式中：A 0 和 A t 表示照射前后的吸光度；t 为照射时
择性修饰。将二氢卟啉 e6（Ⅲ）（100 mg，0.17 mmol） 间（0~60 min）。
溶于二氯甲烷（5 mL），在冰水浴（0 ℃）下依次加 1.6 单线态氧检测
入 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐 利用 DPBF 作为单线态氧捕获剂，亚甲基蓝
（32 mg，0.17 mmol）、4-二甲氨基吡啶（20.7 mg， （MB）作为参照，其单线态氧产率为 0.49。测试二
0.17 mmol）和化合物Ⅱ（33 mg，0.17 mmol），氮 氢卟吩 e6 及其衍生物在有机溶剂中的单线态氧产
气保护室温下反应 20 h，反应结束后反应液用饱和 率。配制光敏剂（5 μmol/L）与 DPBF（50 μmol/L）
氯化钠溶液洗涤，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤， 的二甲基亚砜混合溶液，置于 1 cm×1 cm 的比色皿
减压浓缩得固体，用二氯甲烷溶解，硅胶柱层析分 中。用 660 nm 的 LED 光照射样品溶液，光强 1.7
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离，洗脱条件为 V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=40∶1，得 J/cm ，在 1 min 内每隔 10 s 测定受试溶液在 417 nm
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到化合物Ⅳ（48 mg），收率为 39%。HNMR（CDCl 3 ， 处的吸光度。根据式（2）计算反应速率常数（k obs ）：
400 MHz），δ：9.75 (s，1H)，9.59 (s，1H)，8.83 (s， ln(A 0 /A t )=k obs ×t （2）
1H)，8.07 (dd，J = 17.5、11.7 Hz，1H)，6.86 (s，2H)， 式中：A 0 和 A t 分别代表在 0 和 t s 时溶液吸光度。
6.36 (d，J = 17.8 Hz，1H)，6.06 (dd，J = 118.8、 之后，通过比较样品与参照 MB 的速率常数，
48.7 Hz，6H)，5.47 ~5.18 (m，2H)，4.62 ~ 4.38 (m， 按式（3）计算化合物单线态氧产率。
2H)，4.14 (q，J = 7.1 Hz，1H)，3.82 (s，2H)，3.76 k (PS)   (PS) （3）
(s，3H)，3.50 (s，3H)，3.46 (s，1H)，3.32 (s，3H)， k (ref )  （ ref）
3.02 (d，J = 12.6 Hz，1H)，2.74 (d，J = 13.7 Hz， 式中：k（PS）代表待测化合物的反应速率常数；k
1H)，2.10 (d，J = 40.1 Hz，2H)，1.76 (dd，J = 16.2、 （ref）代表参照品的反应速率常数；ϕ（PS）代表
13
6.3 Hz，6H)，1.56 (s，1H)； CNMR(CDCl 3 ， 待测化合物的单线态氧产率；ϕ（ref）代表参照品的
150 MHz)，δ：180.7，179.2，177.7，175.9，172.4， 单线态氧产率。
169.8，156.4，149.0，145.0，139.6，136.3，136.1， 1.7 细胞培养及摄取率分析
135.4，135.3，134.9，130.7，130.0，129.5，129.5， 将 Hela 细胞在含体积分数 10%胎牛血清、
129.4，128.0，126.6，125.0，121.9，121.8，111.4， 100 IU/mL（IU 指 1 min 转化 1 μmol 底物的酶量）
102.1，102.0，98.7，94.2，60.4，54.3，53.1，50.8， 青霉素和 100 g/L 链霉素的 DMEM(H)培养基中于
49.6，38.7，31.2，29.7，22.8，19.7，17.8，12.4， 37 ℃在体积分数 5% CO 2 的潮湿气氛中培养。对于
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12.2，11.4；IR (KBr，cm )：3384.46，2973.70，2927.41， 细胞摄取测定，配制待测试化合物 0、0.25、0.5、1、
2883.06，1751.05，1700.90，1600.63，1452.14，1380.78， 2、4 μmol/L 的色谱甲醇溶液，各取 100 μL，用酶标
1263.14 ； HR-MS ， m/Z ： C 43 H 42 N 6 O 8 ，测试值 仪检测荧光强度，以荧光强度对化合物浓度作图，
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769.2982[M–H] ，计算值 770.3064。 绘制化合物的标准曲线。将 Hela 细胞接种在 96 孔
1.3 紫外-可见光谱 板中并培养 24 h，然后与化合物共孵育 8 h，除去培
将化合物以 5 μmol/L 浓度溶解在二甲基亚砜 养基，用 PBS 清洗 2 次，加入 100 μL 色谱甲醇，
中，使用紫外-可见-近红外分光光度计记录吸收光 摇床振荡 10 min，酶标仪检测溶液荧光强度，根据
谱。收集 300~800 nm 光谱数据。所有实验均在室温 标准曲线计算化合物浓度。摄取率计算公式为：
下使用石英比色皿进行。 摄取率/%=细胞中化合物的物质的量/细胞孵育
1.4 荧光光谱 时加入化合物的物质的量×100 （4）
将化合物以 5 μmol/L 浓度溶解在二甲基亚砜 1.8 噻唑蓝法分析
中，使用荧光光谱仪记录荧光光谱。激发波长 光毒性活性评价：收集对数生长期的 Hela 细胞
400 nm，发射波长 600 nm，狭缝 2 nm。所有实验均 并接种在 96 孔板中。在培养箱中将细胞与培养基共
在室温下使用石英比色皿进行。 培养 24 h。将化合物与细胞温育 8 h 后，吸出上清
1.5 光降解实验 液，用 PBS 洗涤两次，加入新鲜培养基。然后将其
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将化合物以 5 μmol/L 浓度溶解在二甲基亚砜 暴露于 660 nm 光照射 2 min。光强度为 1.7 J/cm 。
中， 然后 用 660 nm 激光 照射溶液。输出功率 然后孵育细胞 12 h，每孔加入 20 μL 噻唑蓝溶液