Page 164 - 《精细化工》2021年第9期
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·1878·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 38 卷

            （5 g/L），继续培养 24 h，弃去上清液，每孔加入                       砜，测量二者的紫外-可见光谱及荧光光谱，结果见
            200 μL 二甲基亚砜，摇床振荡 10 min，用酶标仪测                     图 1。图 1 显示，化合物Ⅳ和二氢卟吩 e6 的紫外-
            量 570 nm 的吸光度。根据式（5）计算细胞生存率。                       可见光谱相似，都在 660~670 nm 范围内具有强吸收
            所有实验均重复 3 次。                                       （图 1a）。化合物Ⅳ在近红外区保持强吸收有益于
                 细胞生存率/%＝(OD expriment –OD blank )/            肿瘤的 PDT。同时，在 400 nm 的光激发下，化合
                    (OD control –OD blank )×100       （5）      物Ⅳ在 660~670 nm 范围内显示出荧光发射（图 1b）。
                                                               分析表明，呋咱结构的引入并未显著改变分子的光
            式中：OD expriment 代表加药组溶液吸光度；OD control
            代表不加药对照组溶液吸光度；OD blank 代表不加药                       物理性质。
            也不加细胞的空白组溶液吸光度。
                 暗毒性活性评价：同光活性评价操作的区别在
            于，将 96 孔板置于暗室中 2 min，再放入 37  ℃培
            养箱（体积分数 5% CO 2 ）中孵育 12 h。
            1.9    细胞内 ROS 检测
                                        5
                 首先，将 Hela 细胞以 1×10 /孔接种在 6 孔板中
            并孵育 24 h。用 1  μmol/L 的二氢卟吩 e6 及其衍生
            物与细胞共孵育 24 h，然后收获细胞，将细胞与
            5 μmol/L 的 DCFH-DA 在 37 ℃孵育 20 min。用 PBS
            清洗掉多余的 DCFH-DA，将细胞暴露于 660 nm 光
                                      2
            照射 2 min。光强度为 1.7 J/cm 。激发波长 488 nm，发
            射波长 525 nm，通过流式细胞仪检测 ROS 荧光探针
            DCFH-DA 的荧光信号强弱来标定细胞内 ROS 的浓度。
            1.10    细胞内 NO 检测
                                        5
                 首先，将 Hela 细胞以 1×10 /孔接种在 6 孔板中
            并孵育 24 h。用 1 μmol/L 的二氢卟吩 e6 及其衍生物
            与细胞共孵育 24 h，然后收获细胞，将细胞与 5 μmol/L
            的 DAF-FM DA 在 37  ℃孵育 20 min。用 PBS 清洗掉
            多余的 DAF-FM DA，将细胞暴露于 660 nm 光照射

                                  2
            2 min。光强度为 1.7 J/cm 。激发波长 498 nm，发射波               图 1   化合物在 DMSO 中的 UV-Vis 光谱（a）和荧光发
            长515 nm，通过流式细胞仪检测NO 荧光探针DAF-FM                          射光谱（b）
            DA 的荧光信号强弱来标定细胞内 NO 的浓度。                           Fig. 1    UV-Vis spectra (a) and fluorescence  emission  (b)
                                                                     spectra of compounds in DMSO
            1.11   细胞内 GSH 水平分析
                 使用 GSH 和 GSSG 分析试剂盒测量细胞内                      2.2    光化学性质
                                           5
            GSH。首先，将 Hela 细胞以 1×10 /孔接种在 6 孔板                      单线态氧产率是评价光敏剂活性的重要指标之
            中并孵育 24 h。用 1  μmol/L 的二氢卟吩 e6 及其衍                 一，也是光致漂白的主要原因。光漂白性质是反映
            生物与细胞共孵育 24 h，吸出上清液，用 PBS 洗涤                       光敏剂在光激发条件下结构稳定性的一个重要性
            两次，并用新鲜培养基替换。然后将其暴露于 660 nm                        质 [39] 。本文评价了与光动力活性评价相同的实验条
                                         2
            光照射 2 min。光强度为 1.7 J/cm 。继续孵育细胞 4 h                件下所设计化合物的光漂白性及单线态氧产率，结
            后收集细胞。然后，利用液氮和 37 ℃水浴对样品细                          果见图 2。在 660 nm 光源照射下，随时间延长，化
            胞进行两次 快速的冻融 ，将裂解物 在 4  ℃以                          合物的吸光度逐渐下降，Ⅳ的光稳定性相比于二氢
            10000 r/min 离心 5 min 收集上清液。之后，将 0.02 mL            卟吩 e6 略降低，在持续照射 60 min 时，化合物Ⅳ
            上述上清液添加至试剂盒的测试工作液中，并在室                             的降解率约为 50%（图 2a、b）。参照文献[40]的方
            温下共同孵育 2 min。使用酶标仪检测 405 nm 处的                     法，利用脂溶性的 DPBF 作为单线态氧捕获剂，以
            吸光度。
                                                               MB 作为参照，测试光敏剂在有机溶剂中的单线态
                                                               氧产率（图 2c）。由图 2c 可知，化合物Ⅳ的单线态
            2   结果与讨论
                                                               氧产率为 0.49，二氢卟吩 e6 的单线态氧产率为 0.56。
            2.1    光物理性质                                       表明呋咱结构的引入对于光敏剂分子在溶液中产生
                 将化合物Ⅳ及二氢卟吩 e6 分别溶于二甲基亚                        单线态氧的能力及光漂白性影响不大。
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