Page 142 - 《精细化工》2022年第11期

·2292· 精细化工 FINE CHEMICALS 第 39 卷

下观察囊泡是否被成功制备，为进一步制备纳米级 气和 5% CO 2 培养箱及 37 ℃条件下铺于 96 孔板内
磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡用于药物载体奠定基础。 保持 12 h，使用 100 μL PBS 冲洗 2 遍，将 10 μL 磷
现以微米级 A 16 的制备方法为例介绍样品制备方法， 脂-嵌段共聚物杂化囊泡样品与 RAW 264.7 小鼠巨
其他样品制备方法与其相同，只是原料混合比例不同。 噬细胞共培养保持 5 h，使用细胞培养液冲洗细胞 2
次，随后每个孔内加入 110 μL 细胞培养液，再加入
表 1 样品的命名 10 μL 细胞计数试剂盒溶液，将 96 孔板放回 37 ℃
Table 1 Naming of samples
培养箱中保持 2 h，取一新的 96 孔板，将上一个孔
样品 命名 样品 命名
板中液体依次移除 100 μL 按顺序滴加到新 96 孔板
POPC 0.3P1 0.7 A 1 POPC 0.8POEPC 0.2 A 10
POPC 0.7P1 0.3 A 2 POPC 0.1POPS 0.2P1 0.7 A 11 中，最后使用酶标仪在波长 570 nm 下进行测试，根
A 12 据式（1）计算出细胞存活率，RAW 264.7 小鼠巨噬
POPC 0.3P2 0.7 A 3 POPC 0.5POPS 0.2P1 0.3
A 13 细胞对磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡的内化效果利用
POPC 0.7P2 0.3 A 4 POPC 0.1POPS 0.2P2 0.7
A 14 荧光电子显微镜获得。
POPC 1.0 A 5 POPC 0.5POPS 0.2P2 0.3
POPC 0.1POEPC 0.2P1 0.7 A 6 POPC 0.8POPS 0.2 A 15 A  A
细胞存活率 / %= s b  100 （1）
POPC 0.5POEPC 0.2P1 0.3 A 7 POPC 0.3P3 0.7 A 16 A  A b
c
A 17
式中：A s 为实验组吸光度（含 RAW 264.7 小鼠巨噬
POPC 0.1POEPC 0.2P2 0.7 A 8 POPC 0.7P3 0.3
A 18
POPC 0.5POEPC 0.2P2 0.3 A 9 POPC 0.1POEPC 0.2P3 0.7
细胞、培养基、细胞计数试剂盒溶液、磷脂-嵌段共

1.2.1 微米级磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡 A 16 的组装 聚物杂化囊泡）；A b 为空白组吸光度（含培养基、细
胞计数试剂盒溶液）；A c 为对照组吸光度（含 RAW
首先，使用无水乙醇和蒸馏水分别超声清洗
264.7 小鼠巨噬细胞、培养基、细胞计数试剂盒溶液）。
ITO 玻璃电极（25 mm×45 mm）15 min；随后，在
1.2.4 磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡载体内药物的体
室温下 N 2 吹拂 ITO 玻璃电极使其干燥。将带有红色
外释放实验
荧光 TR-DHPE（0.012 mg）的 POPC（0.288 mg）
磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡载体内药物的体外
和 0.7 mg 带有绿色荧光嵌段共聚物 P3 溶于 200 μL
释放实验以抗癌药物 DOX 为例。磷脂-嵌段共聚物
氯仿中，记作 POPC（TR-DHPE）-P3 混合溶液。在
杂化囊泡负载 DOX 溶液过程参照 1.2.1 节实验过
ITO 玻璃电极表面滴加 5 μL POPC（TR-DHPE）-P3
程，只是将矩形框架内注满蒸馏水换成质量浓度为
混合溶液，同时迅速将混合溶液平铺于 ITO 玻璃电
极表面，将处理后的 ITO 玻璃电极置于真空干燥箱 1 mg/L DOX 水溶液。负载 DOX 磷脂-嵌段共聚物杂
中 40 ℃抽真空干燥至少 2 h。利用真空脂将聚四氟 化囊泡载体的释放曲线由透析法测定 [22] 。将负载
乙烯材质制备的矩形框架固定在 ITO 玻璃电极表 DOX 的磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡载体置入截留相
面，在矩形框架内注满蒸馏水，调节交流电电压为 对分子质量为 14000 的透析袋内，通过磷脂-嵌段共
5 V、频率 10 Hz，在 40 ℃下，对样品施加 4 h 交 聚物杂化囊泡载体外部游离的 DOX 含量随时间的
流电处理以获得样品 A 16 。利用荧光电子显微镜观察 变化关系获得磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡载体药物
A 16 形貌，确认囊泡膜表面荧光物质是否存在。 释放曲线。首先，吸取 0.5 mL 负载 DOX 的磷脂-
1.2.2 纳米级磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡 A 1 的制备 嵌段共聚物杂化囊泡载体溶液封入处理后的透析袋
将 0.3 mg POPC 和 0.7 mg 嵌段共聚物 P1 混合 内，随后将装有磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡载体溶液
置于圆底烧瓶底部，在 37 ℃下，向圆底烧瓶中加入 的透析袋置于 20 mL PBS 缓冲溶液中，在 37 ℃下
1 mL HEPES2 缓冲溶液，对烧瓶内混合溶液进行涡旋 进行磁力搅拌处理。每隔 1 h 取出 2 mL 上清液，测试
搅拌处理。室温下，在脂质体挤出器的帮助下，将上 该上清液的紫外吸收，同时向母液中补充等量的 PBS
述磷脂和嵌段共聚物的混合溶液通过孔径为 200 nm 缓冲溶液。当磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡载体不再向
的聚碳酸酯过滤膜，从而获得纳米级 A 1 样品。 外释放药物后，加入聚乙二醇辛基苯基醚（TritonX-
囊泡的粒径、多分散性指数（PDI）及 Zeta 电 100）以破坏磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡载体的双分
位使用动态光散射仪测量，其中材料折光率设为 子层结构，使载体内部的 DOX 全部释放出来，在
1.590，分散剂指数为 1.33，当样品的 PDI>0.4 时， 232 nm 波长下测其吸光度。根据式（2）计算，即可
代表样品不合格，需舍弃。对于测量 Zeta 电位的样 得到磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡载体内药物释放率：
品需要在 HEPES1 缓冲溶液中制备。 A
杂化囊泡载体内药物释放率 /%= x  100 （2）
1.2.3 细胞摄取实验 A 总
RAW 264.7 小鼠巨噬细胞在体积分数为 95%空 式中：A x 为任意一个时间点测得的吸光度；A 为所
总