Page 145 - 《精细化工》2022年第11期

第 11 期 宗 薇，等: 基于磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡的药物载体 ·2295·

由图 3a 可见，磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡 A 5 和 嵌段共聚物杂化囊泡 A 18 表面带有正电荷，与带有负
A 10 对 RAW 264.7 小鼠巨噬细胞存活率影响不大， 电荷的细胞膜更容易发生正负电荷吸引作用 [23] ，从而
其细胞存活率均约 100%，而其他样品明显降低了 促进细胞融合作用，为载体内药物传输提供帮助。
RAW 264.7 小鼠巨噬细胞的存活率，该现象是由于
嵌段共聚物 P1 或 P2 的加入引起的。其中，磷脂-
嵌段共聚物杂化囊泡 A 3 和 A 8 与 RAW 264.7 小鼠巨
噬细胞共培养后细胞存活率分别为 93.4%±1.1%和
92.1%±0.8%，与其他磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡样品
相比，其细胞存活率相对较高，该结果证明了嵌段
共聚物 P2 更适合制备成磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡，
作为药物载体。为考察细胞存活率对样品体积含量
的依赖性，不同用量样品，即 10、20、30 μL 磷脂-
嵌段共聚物杂化囊泡 A 3 和 A 8 分别与 RAW 264.7 小
鼠巨噬细胞共培养 5 h，细胞存活率柱状图如图 3b
所示。由图 3b 可见，随着样品体积的增加，RAW
264.7 小鼠巨噬细胞存活率逐渐降低。随后，进一步
考察 RAW 264.7 小鼠巨噬细胞存活率对培养时间的
依赖性，将 10 μL 磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡 A 3 和
10 μL 磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡 A 8 分别与 RAW
264.7 小鼠巨噬细胞共培养 5、12、24、36、48 h 后，
结果如图 3c 所示。由图 3c 可知，细胞存活率变化
幅度不大，均能保持在 90%左右，结果表明，由 POPC
和嵌段共聚物 P2 制备的磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡
适合作为药物载体。 图 4 磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡与 RAW 264.7 小鼠巨噬
为了利于在荧光电子显微镜下观察载体被细胞 细胞共培养后的荧光电子显微镜照片（a）；磷脂-
嵌段共聚物杂化囊泡与 RAW 264.7 小鼠巨噬细胞
摄入情况，此时，将嵌段共聚物 P2 换成被标记荧光
共培养后平均细胞荧光强度（b）
的嵌段共聚物 P3。将 A 16 、A 18 与 RAW 264.7 小鼠
Fig. 4 Microscopic images of phospholipid-block copolymer
巨噬细胞共培养 5 h 后，取培养后细胞在荧光电子 hybrid vesicles co-cultured with macrophages (a);
显微镜下观察其形貌，结果如图 4a 所示，其中，图 MCF after co-culture of phospholipid-block copolymer
hybrid vesicles and macrophages (b)
4 中绿色荧光为嵌段共聚物 P2 标记荧光基团，即嵌
段共聚物 P3 所显示的荧光，其最大激发波长为 2.4 磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡 A 8 内药物体外释放
463 nm；蓝色荧光为 DAPI 染色 RAW 264.7 小鼠巨 分析
噬细胞的细胞核，其最大发射波长为 364 nm。图 4ai3 分别选用了 pH=4.2、pH=7.4 的 PBS 缓冲溶液
和 aii3 分别为前两列图片的叠加图，通过该组荧光 作为刺激负载 DOX 的纳米级磷脂-嵌段共聚物杂化
电子显微镜照片可以清晰地观察到，RAW 264.7 小 囊泡 A 8 （DOX@A 8 ）进行药物释放的微环境溶液，
鼠巨噬细胞对磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡 A 18 的摄取 药物释放曲线如图 5 所示。从图 5 可见，DOX@A 8
量更大。通过流式细胞术测量磷脂-嵌段共聚物杂化 在 pH=7.4 的条件下酸碱稳定性较好，经过 12 h 循
囊泡 A 16 和 A 18 进入 RAW 264.7 小鼠巨噬细胞后平 环，药物的提前释放率为 5.62%±0.05%。当模拟癌
均细胞荧光强度（MCF），利用 MCF 判断 RAW 264.7 细胞内部酸性环境的 pH=4.2 条件下刺激 DOX@A 8 进
小鼠巨噬细胞对磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡的摄入 行药物释放，药物释放率达到 73.25%±0.03%，磷脂-
量，结果如图 4b 所示。由图 4b 可见，磷脂-嵌段共 嵌段共聚物杂化囊泡 A 8 对酸环境敏感而释放药物
聚物杂化囊泡 A 18 在 RAW 264.7 小鼠巨噬细胞中的 的原理基于在 pH 降低条件下，磷脂分子中脂肪酸
荧光强度更大，该结果说明，磷脂-嵌段共聚物杂化 羧基脂质化成六方晶相的非相层结构，从而使膜融
囊泡 A 18 容易被 RAW 264.7 小鼠巨噬细胞所摄取， 合，加速载体内药物释放 [24] 。磷脂-嵌段共聚物杂化
磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡 A 18 适合作为治疗 RAW 囊泡在血液和正常组织的酸碱环境中可以稳定存
264.7 小鼠巨噬细胞内缺陷或疾病的药物载体。该实 在，磷脂-嵌段共聚物杂化囊泡 A 8 携带着 DOX 药物
验结果与理论分析一致，因为从理论角度考虑磷脂- 运输到病变组织，随后在 3 h 内释放一半以上的药