Page 150 - 《精细化工》2022年第11期
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·2300·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 39 卷

            度为 1 mg/L LPS 溶液作为阳性对照，采用酶标仪在                      和 5.97%。BLP-1 和 BLP-2 的多糖质量分数分别为
            550 nm 处测量每孔吸光度（A），按式（3）计算细                        80.16%和 82.48%；蛋白质质量分数分别为 3.26%和
            胞增殖率，测定多糖对巨噬细胞的毒性：                                 3.11%。说明提取方式的不同影响多糖得率；采用纤
                                     A                         维素酶降解细胞壁中纤维素，加速多糖从细胞中释
                     细       率胞增  / 殖  %=  实验组   100    （3）
                                    A 阳性对照                     放到溶剂中，说明其能够准确、快速和有效地提取
                                                               多糖，提高多糖制备效率；蛋白质与半纤维素之间
            1.4.4.2   中性红 RAW264.7 的吞噬作用
                                      5
                 将对数期的细胞以 1×10 （细胞/孔）的密度接                      的共价键结合紧密，在提取过程中一并溶出。
                                                               2.2   相对分子质量和单糖组成测定
            种在 96 孔板中并培养 24 h。在去除培养基后，用
                                                                   采用 HPGPC 测定了 BLP-1 和 BLP-2 两种多糖
            0.1 mol/L PBS 溶液（pH 6.8）清洗 2 次孔。然后，
                                                               的相对分子质量，结果见图 1。
            分别加入质量浓度为 100、300、500、700、900 mg/L

            的多糖溶液（100 μL）并培养 24 h。阳性对照组和空
            白对照组分别为 100  μL 质量浓度为 1 mg/L 的 LPS
            水溶液和 100 μL 空白培养基。孵育后，用 0.01 mol/L
            PBS（pH 7.4）溶液洗涤平板 2 次，并用 150 μL 中性
            红试剂孵育 1 h 后，去除上清液，并向孵育液中添加
            150 μL 裂解液〔V(冰醋酸)∶V(无水乙醇)=1∶1〕，再
            孵育 2 h。采用酶标仪在 550 nm 处测量每孔吸光度
            （A），研究 BLP-1 和 BLP-2 对巨噬细胞的吞噬作用。
            1.4.4.3  NO、IL-6 和 TNF-α 分泌
                                                   5

                 小鼠巨噬细胞 RAW264.7 细胞以 1×10 细胞/孔                      图 1  BLP-1 和 BLP-2 的相对分子质量分布
            的密度置于 96 孔板中，培养 24 h。然后，去除先前                       Fig. 1    Relative molecular mass distribution of BLP-1 and
            的培养基，并用 0.1 mol/L PBS 溶液（pH 6.8）冲洗                       BLP-2

            2 次孔后，在 96 孔板中分别添加 100  μL 不同质量                        由图 1 可观察到，BLP-1 和 BLP-2 的相对分子
            浓度（100、300、500、700、900 mg/L）的多糖溶                   质量分布相对狭窄且呈尖锐的对称峰，保留时间约
            液、阳性对照和空白对照。NO、IL-6 和 TNF-α 的                      为 21.94 和 21.76 min。根据获得的校准曲线，BLP-1
            分泌量分别按照 NO 检测试剂盒、TNF-α 免疫应答                        和 BLP-2 的相对分子质量分别为 20103 和 22652。
            试剂盒和 IL-6 免疫应答试剂盒的说明进行检测。                              通过对两种多糖组分进行分析检测，并与标准
            1.5   数据统计                                         单糖的色谱图比较，确定了 BLP-1 和 BLP-2 的单糖
                 采用 SPSS statistics 19.0 对实验数据进行统计             成分，结果见图 2。
            分析，采用单因素方差分析（ANOVA）和 Duncan
            多范围检验分析显著性水平和组间差异。所有实验
            均重复 3 次，用“平均值±标准方差（SD）”表示。

            2   结果与讨论

            2.1    两种方法制备的多糖化学成分分析
                 表 1 总结了 BLP-1 和 BLP-2 的得率、多糖和蛋
            白质质量分数。

                表 1   两种方法制备的琉璃苣叶多糖的化学组成

            Table 1    Yield and physicochemical  properties of   a—Fuc；b—Rha；c—Ara；d—Gal；e—Glc；f—Xyl；g—Man；
                       polysaccharides                         h—Fru；i—GalA；j—GlcA
                   得率  ①  多糖质量 蛋白质质量        单糖摩尔分数/%
             样品                                                图 2  BLP-1（A）、BLP-2（B）和标准单糖（C）成分离
                    /%   分数/%     分数/%    Ara Gal  Glc  Xyl
                                                                    子色谱图
             BLP-1 6.45   80.16    3.26   14.0  6.1  72.7  7.2  Fig.  2  Ion chromatogram  profiles of monosaccharide
             BLP-2 5.97   82.48    3.11   23.9  12.3  58.4  5.4         composition  of BLP-1 (A), BLP-2 (B)  and
                ①制备的多糖样品的质量占琉璃苣叶粉末质量的百分数。                               standard monosaccharide (C)

                 由表 1 可知，BLP-1 和 BLP-2 得率分别为 6.45%                 采用不同浓度的混合标准品进行定量分析，并
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