Page 148 - 《精细化工》2022年第11期
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·2298·                            精细化工   FINE CHEMICALS                                 第 39 卷

                 琉璃苣（Borago officinalis L.）是紫草科琉璃苣             （Ara）、D-甘露糖（Man）、D-半乳糖（Gal）、D-
            属一年生草本植物，稍具黄瓜香味，其分布广泛，                             葡萄糖（Glc）、D-木糖（Xyl）、D-半乳糖醛酸（GalA）、
            具有悠久的食用和药用历史。鲜叶及干叶可用于炖                             D-葡萄糖醛酸（GlcA）〕、对硝基苯-β-D-吡喃半乳糖
            菜、炖汤以及饮料的调味。然而，大部分通常被当                             苷（PNPG）、三氟乙酸（TFA），AR，成都德思特
            作废物丢弃，造成一定的浪费，附加值较低。开展                             生物技术有限公司；脂多糖（LPS）、果糖（Fru）、
            琉璃苣叶多糖结构和活性研究具有重要意义。                               标准品，透析袋（截留相对分子质量为 3000），上
                 目前，琉璃苣研究主要集中在油脂提取、脂肪                          海源叶生物科技有限公司；其他化学品均为市售分
                                                       [1]
            酸成分分析及产品开发等方面。例如：任飞等 采                             析纯。
            用超临界 CO 2 流体优化了萃取琉璃苣籽油工艺条                              Nicolet iS5 型傅里叶变换红外光谱仪、Dionex
            件，采用气相色谱法确定了其富含油酸、亚油酸和                             ICS-1100 离子色谱仪（配有电化学检测器），美国
                          [2]
            -亚油酸；李童 采用响应面法优化了索氏提取法提                           Thermo Scientific 公司；Q5000IR 热重分析仪，美国
            取琉璃苣籽油脂工艺条件，所得油脂具有较好抗氧                             TA 仪器公司；RT6100 酶标仪，上海涵飞医疗器械
            化效果，能延长野生型秀丽隐杆线虫的寿命，采用                             有限公司；UV2150 可见分光光度计，尤尼柯（上
            乙醇注入-超声波法制备的油脂脂质体形态稳定、贮                            海）仪器有限公司；PHS-3C 型 pH 计，上海精密科
            藏时间较长。近年来，从植物中提取的多糖在癌症、                            学仪器有限公司；XO-SM400 超声微波化学反应器，
            炎症、细菌感染和免疫调节等方面表现出临床积极                             南京先欧仪器制造有限公司；DL6M 大容量冷冻离
            作用  [3-9] 。不同的提取方法会影响多糖的化学结构和                      心机，湖南凯达科学仪器有限公司；LGJ-12 立式真
            性质。其中，热水提取法是应用最广的方法，但其                             空冷冻干燥机，北京松源华兴生物技术有限公司；
            耗时、能耗高、杂质含量高、提取效率有限；超临                             Synergy Neo HTS 微孔板检测仪，美国 Biotek 公司；
                                                               FEIQuanta450 场发射环境扫描电子显微镜，美国 FEI
            界 CO 2 萃取技术具有操作参数易于控制、萃取时间
                                                               公司；BK-SY96A 酶标仪，山东博科仪器有限公司；
            短等优点。然而，超临界 CO 2 是一种非极性溶剂，对
            极性强、相对分子质量大的天然物质的萃取率低                     [10] 。   Agilent1260 凝胶渗透色谱仪（HPGPC）（配 G1362A
                                                               示差折光检测器），荷兰 Aglient 公司。
            酶辅助提取法具有提取率高、投资成本低、能耗低、
                                                               1.2   方法
            技术环保、操作简单等优点，可在温和的处理条件
                                                               1.2.1   纤维素酶辅助和微波辅助提取法提取琉璃苣
            下进行，易于实现工业化            [11] 。微波辅助提取法可提
                                                                     叶多糖
            高系统内部温度，改善溶剂在固体基质中的扩散，
                                                                   将琉璃苣叶粉末在室温下用石油醚（沸点为
            从而增强了目标物质的提取效果               [12] 。
                                                               30~60  ℃）脱脂脱色 3 次，8 h/次，然后在室温下用
                 本研究拟分别采用纤维素酶辅助和微波辅助提
                                                               体积分数为 95%乙醇室温浸泡 12 h 以去除小分子物
            取法来提取琉璃苣叶多糖，并对其理化性质进行分
                                                               质，对预处理后的残留物进行过滤，40  ℃下风干。
            析。通过分析 α-葡萄糖苷酶和 α-淀粉酶的抑制效果
                                                                   纤维素酶辅助提取法提取琉璃苣叶多糖：首先，
            来评价其降血糖活性，通过检测人肝癌细胞 HepG2、
                                                               将 2 g 纤维素酶溶解在 98 g 去离子水中，并在 40  ℃
            人乳腺癌细胞 MX-1 和人肺腺癌细胞 A549 细胞的抑
                                                               下活化 30 min，得到质量分数为 2%的纤维素酶活化
            制率来评价其抗癌活性，通过检测 RAW246.7 的免
                                                               液；然后，按料液比为 1∶20（g∶mL，下同）将预
            疫因子分泌来评价免疫活性，为研究多糖结构和生
                                                               处理后的琉璃苣叶粉末加入上述纤维素酶活化液中，
            物活性的相关性提供理论依据，以期为多糖的进一
                                                               并用 0.2 mol/L 磷酸盐缓冲溶液 （PBS 溶液，pH 2.5）
            步利用提供参考。
                                                               调节 pH 为 4.8，在 55  ℃下提取 3 h；然后，加热至
            1   实验部分                                           95  ℃再持续 30 min 以使纤维素酶失活。
                                                                   微波辅助提取法提取琉璃苣叶多糖：将 10 g 预
            1.1   试剂与仪器                                        处理后的琉璃苣叶粉末按料液比 1∶20 在微波功率
                 琉璃苣叶，由甘肃高台县西北琉璃苣农民专业                          300 W、80  ℃提取 15 min，获得多糖粗提液。
            合作社提供，清洗、50  ℃干燥后粉碎，获得的粉末                              上述两种方法粗提液以 5000 r/min 离心 10 min
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            储存在玻璃干燥器中；纤维素酶（5×10  U/g）、NO                       后，添加 3 倍体积的无水乙醇，4  ℃静置 12 h，得
            检测试剂盒、TNF-α 免疫应答试剂盒、IL-6 免疫应                       多糖沉淀物，将其倒入去离子水中，重新溶解后与
            答试剂盒、DMEM 培养基，北京索莱宝科技有限公                           Sevag 试剂〔V(氯仿)∶V(正丁醇)=4∶1〕等体积混
            司；牛血清白蛋白（BSA）、抗坏血酸、单糖标准品                           合以去除相关蛋白质。Sevag 法处理后，上层液体
            〔L-岩藻糖（Fuc）、L-鼠李糖（Rha）、L-阿拉伯糖                      用流动的自来水透析（截留相对分子质量为 3000）
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