Page 167 - 《精细化工》2022年第3期

第 3 期 吴 淇，等: 大麻二酚类似物的合成及其抗氧化性和抑菌性 ·589·

水和0.4 mL质量分数为0.1%三氯化铁水溶液，于50 ℃ 环内双键缩合的环化产物。酚原料中苯环上供电子
水浴中放置 10 min，测定溶液在 700 nm 处的吸光度。 基团的活性及数量越大，烷基化反应速度越快且产
1.3.4 抗脂质过氧化能力 物收率越高 [20] 。
抗脂质过氧化能力的评价 [16] ：在 0.15 mL 质量 表 1 中，因为酚羟基的供电子能力大于甲基，
浓度为 2 g/L 的过氧化氢水溶液中加入 0.5 mL 橄榄 所以间苯三酚的苯环上电子云密度高于其他 3 个烷
油-乙醇溶液（两者质量比为 1∶3），加入 1 mL 质 基酚，这使得产物Ⅰ在 25 ℃有较好的收率，而单
量浓度 0.1 g/L 的样品乙醇溶液和 2 mL 质量分数 烷基酚室温下几乎不与 α-水芹烯反应。
0.2%的硫代巴比妥酸溶液于 37 ℃下反应 25 min； 类似物Ⅰ的 NMR 数据见 1.2.1 节。类似物Ⅰ的
然后加入 2 mL 质量分数为 20%的三氯乙酸水溶液， 1 HNMR 中，δ3.74（1H, 1′-H）双重峰和δ5.48（1H,
转移至 90 ℃水浴中显色 30 min 后冷却至室温，加 6′-H）的单峰分别对应 α-水芹烯反应后环上取代位
入 1 mL 三氯甲烷萃取有机相，测定上层溶液在 532 的氢（C-1′）和烯烃的氢（C-6′）；同时反应后 α-水
nm 的吸光度，其抑制率按式（3）计算： 芹烯失去一对双键，处于δ5.80 和 5.90 的多重峰和
脂质过氧化抑制率/%=[1–(A–A 1 )/A 0 ]×100 （3） 双重峰消失（该双键上的两个氢），表明烷基化反应
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其中：A、A 1 和 A 0 分别表示样品、以去离子水代替 的完成。 CNMR 数据中，δ124.97 和 109.67 处的
过氧化氢溶液和以乙醇代替样品的吸光度。 两个单峰对应新生成的 C-5′和 C-6′处的烯烃碳。

1.3.5 黄嘌呤氧化酶（XOD）抑制能力 表 1 主要产物及其收率
XOD 抑制能力的评价 [17] ：将 2 mL 不同质量浓 Table 1 Main products and their yields
度的样品（用 0.2 mol/L 磷酸盐缓冲液溶解，pH 7.5）、 25 ℃ 60 ℃
底物 产物
20 µL XOD（10 µmol/L）和 1 mL 黄嘌呤（6 mmol/L） 收率/% 收率/%
加入到比色皿中，分别读取 0 和 60 s 时 295 nm 处
溶液的吸光度，计算抑制率：
XOD 抑制率/%=(1–∆A/∆A 0 )×100 （4） 72 74
其中：∆A 和∆A 0 分别为样品和空白对照的吸光度变

化量；∆A=A 60 s –A 0 s 。
1.4 CBD 类似物最小抑菌浓度（MIC）和最小杀
菌浓度（MBC）的测定 — 58
MIC 和 MBC 的测定 [3,18] ：在无菌 96 孔板中，
每孔加入 100 μL LB 液体培养基后，在第 1 孔中加
入一定浓度的 100 μL 样品（二甲基亚砜为溶剂），
混匀后取 100 μL 加入第 2 孔中；继续用二倍稀释法
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加样至相应各孔；然后分别将 100 μL 细菌液（1×10
CFU/mL）加入各样品孔，再设置阴性对照（无药物）、

空白（仅 LB 培养基 200 μL）和阳性对照（盐酸四
环素）孔；将载样孔板于 37 ℃下培养 24 h，无细
菌生长孔的药物最低浓度即为受试菌的 MIC；然后， — 56
将以上 96 孔板的含药菌液接种于相应的培养基平

板，37 ℃下继续培养 24 h；无细菌生长的药物浓度
注：“—”代表无产物生成。
即为 MBC。所有检测均为 3 次平行实验。
2.2 类似物Ⅰ与 CBD 及 V C 的抗氧化活性比较
2 结果与讨论 以 CBD 及 V C 为对照，考察了类似物Ⅰ的抗氧
化活性，结果见图 1~4。由图 1 可见，CBD 及其类
2.1 反应温度对收率的影响 似物Ⅰ和 V C 的 DPPH 和 ABTS 自由基清除能力均呈
主要产物及其收率如表 1 所示。 剂量依赖性，并且类似物Ⅰ对 DPPH 和 ABTS 自由
依照傅克反应原理 [19] ，推测大麻二酚类似物合 基清除的 EC 50 值分别是 CBD 的 23.8%和 25.1%（表
成的反应机理为：α-水芹烯经催化生成碳正离子， 2），即抗氧化活性最强，其他化合物未检出对自由
再与酚类化合物发生烷基化反应。由于反应位点为 基的清除能力。文献也报道多酚的抗氧化活性随酚
酚羟基的邻位，Ⅱ~Ⅳ为底物酚羟基与 α-水芹烯的 羟基的数量增加而增加 [21] 。